PGE2通过EP2受体激活Src-EGFR信号转导通路上调Snail促进肝癌细胞侵袭机制的研究

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研究背景:恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一。在我国,肝癌的发病率及死亡率位于第二位,目前对于肝细胞癌还缺乏有效的治疗手段,预后较差。因此,探索肝癌的发病机制及治疗靶点极其重要。前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)是花生四烯酸经环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)催化的主要代谢产物,通过细胞膜上四种EP受体(E prostanoid receptor)发挥作用,可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。研究表明PGE2与多种肿瘤的发展密切相关,其中包括肝细胞癌。肿瘤的侵袭和转移与上皮间叶转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)现象密切相关,目前认为Snail蛋白是调控EMT的一个重要蛋白与多种肿瘤的侵袭转移相关,如卵巢癌、大肠癌等。本课题组的前期研究工作发现PGE2与肝癌细胞的侵袭转移密切相关,且具有上调Snail蛋白的作用。但PGE2通过何种方式调节Snail蛋白表达促进肝癌侵袭和转移的其机制尚未明确。本研究应用PGE2、EP2受体激动剂、EGFR抑制剂、P13K抑制剂等处理肝细胞癌Huh-7细胞,观察Snail蛋白表达水平变化,意在阐明PGE2通过EP2受体调控Snail蛋白表达的机制。研究目的:探讨PGE2通过EP2受体上调肝细胞癌细胞中Snail蛋白的表达及相关的信号转导通路。研究方法:1.细胞培养:常规方法培养肝细胞癌细胞株Huh-7细胞。2.外源性PGE2处理Huh-7细胞,用Transwell方法检测迁移和侵袭能力。3.外源性PGE2和EP2受体激动剂Butaprost处理Huh-7细胞,用Western blot实验检测Snail蛋白水平的变化。4.Src抑制剂PP2、EGFR抑制剂AG1478、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂PP242处理Huh-7细胞,用Western blot实验检测Snail蛋白水平的变化。5. Butaprost处理Huh-7细胞0-60min,以Western blot实验检测Phospho-EGFR、 Phospho-Akt、Phospho-mTOR的变化。研究结果:1.10μM PGE2处理Huh-7细胞12h后,Huh-7细胞的迁移能力较对照组增强了192%(P<0.05);10μM PGE2处理Huh-7细胞24h后,Huh-7细胞的侵袭能力较对照组增强了186%(P<0.05)。2.10μM PGE2处理Huh-7细胞24h后,Huh-7细胞的Snail蛋白表达水平与对照组相比升高了120.15%(P<0.01)。3.5μM Butaprost处理Huh-7细胞24h后,Snail蛋白的表达水平与对照组相比上升了174.15%(P<0.01)。4.与EP2受体激动剂处理组相比,10μM的Src抑制剂PP2和5}μM的EGFR抑制剂AG1478使Huh-7细胞Snail蛋白水平分别下降了89.61%(P<0.01)和67.92%(P<0.01)、10μM的PI3K抑制剂LY294002和5μM的]mTOR抑制剂PP242使Snail蛋白水平分别下降了56.63%(P<0.01)和99%(P<0.05)。5.与EP2受体激动剂处理组相比,10μM Src抑制剂PP2、5μM的EGFR抑制剂AG1478使Butaprost诱导Phospho-Akt的水平下降了85.69%,75.45%(P<0.05)。6.5μM Butaprost处理Huh-7细胞0-60min后,Phospho-EGFR、Phospho-Akt、Phospho-mTOR水平与对照组相比分别上升了91.54%、134.67%、100.24%(P<0.05)。研究结论:本研究结果表明,PGE2能够通过EP2受体上调Huh7细胞Snail蛋白的表达,此作用可能是通过Src/EGFR/Akt/mTOR信号转导通路实现的。
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