虫霉亚门昆虫病原真菌具有专一性强、毒力高、致死快等优点,且能诱发寄主流行病,是昆虫种群的天然调控因子。暗孢耳霉广泛分布于各大洲,是一种具有生物防治应用价值的蚜科专化病原菌,寄主包括桃蚜和竹蚜等农林害虫。为解析暗孢耳霉的杀蚜毒力因子,本研究运用转录组学分析了暗孢耳霉致病相关基因。主要研究结果如下:1.暗孢耳霉染病虫尸和体外培养物样品的转录组测序共产生1.4×10~8条Reads,总计拼接出76643个unigenes,注释源于病原菌暗孢耳霉17231个。在组装的暗孢耳霉unigenes中发现了很多致病性相关基因,包括类枯草杆菌蛋白水解酶(Pr1s),类胰蛋白酶(Pr2s),金属蛋白酶,羧肽酶和内切壳多糖酶等。相较于离体培养的真菌,在染真菌病虫尸中有1110个unigenes的表达发生显著变化,包括985个上调和125个下调的unigenes。在虫尸中上调最多的转录本主要是各种水解酶,包括各类蛋白酶,几丁质酶和酯酶等,这表明这些功能基因涉及侵染过程中破坏寄主表皮组织及利用寄主营养。通过构建系统发育树,发现类Pr1和类杀虫晶体蛋白Cyt编码基因序列与已报道的同类基因相比具有一定独特性。2.利用荧光定量PCR技术研究了暗孢耳霉致病性基因在孢子、液培菌丝、固培菌丝和虫尸状态下的表达水平。结果表明,Pr1和Pr2在不同状态下表达差异显著,虫尸内表达水平达到最高,与转录组学分析结果相一致。此外,类Cyt基因在不同培养条件下的表达水平,结果表明类Cyt表达的最佳培养温度为20℃,最佳葡萄糖浓度为4%,液体摇菌培养3天表达最高,且随着传代次数的增加,该基因的表达会逐渐降低。本研究首次较全面地分析了暗孢耳霉所具有的致病相关因子,为进一步解析与寄主的互作机制及实际应用奠定基础。