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目的 在我国慢性乙型肝炎发病率较高,而HBV感染的慢性化主要是人体细胞免疫功能下降所致。外周血T淋巴细胞亚群是反映人体免疫系统内环境的一个重要指标。目前有实验证明慢性肝炎与细胞免疫的关系,但结论有不同之处。本实验主要通过流式细胞术检测外周血CD3~+ CD4~+,CD3~+ CD8~+,CD3~+细胞在慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带者、对照组间的变化。 材料和方法 一、材料 1.1 研究对象 分三组 对照组10例,沈阳市传染病院健康医护人员;乙肝病毒携带11例,沈阳市传染病院门诊患者;慢性乙型肝炎21例,为沈阳市传染病院住院患者。所有患者按2000年西安会议所修订的病毒性肝炎诊断标准人选。 1.2 主要试剂 TRITESTCD4FITC/CD8PE/CD3PerCP,Optilyse C lysing solution(美国BD公司) 1.3 仪器 流式细胞仪 BECTON DICKINSON FACSort 二、方法 采用荧光三色标记技术和流式细胞仪对所有研究对象进行CD3~+ CD4~+ 、CD3~+ CD8~+、CD3~+ 细胞检测。 结果 1.慢性乙型肝炎组CD3~+ CD4~+/CD3~+ CD8~+百分率比降低,CD3~+ CD8~+百分率升高与对照组有显著性差异(p<0.01,p<0.05)。 2.乙肝病毒携带组CD3~+ CD4~+ /CD3~+ CD8~+ 百分率比降低,CD3~+ CD8~+百分率升高与对照组无显著差异(p>0.05)。 3.CD3+CD4+/CD3+CDS‘百分率比降低、CD3+CDS+百分率升高在三组间有显著性差异(p<0.01,p<0.05),对照组CD3+CD4+/CD3+CDS+百分率比最高,慢性乙型肝炎组CD3‘CDS+百分率最高。 4.各组间CD3+CD4‘百分率,CD3‘百分率无显著性差异。讨论 乙型肝炎是一种免疫相关性疾病,机体感染HBV后并不直接对肝细胞造成损伤,而是通过诱发机体的免疫反应间接损伤肝细胞,同时,机体感染HBV后,外周血各淋巴细胞亚群间的平衡被打破,表现为淋巴细胞亚群百分比,绝对细胞数和功能的改变,这种变化可反映机体的免疫状态。慢性乙型肝炎的免疫机制复杂,其外周血淋巴细胞亚群的变化有争议。乙型肝炎病毒(HBV)感染时对病毒抗原的免疫应答与病毒清除和发病机制相关,包括特异的CDS十细胞毒性T细胞(CTL)和CD4+辅助性T细胞(rrh)、非特异的单核巨噬细胞和自然杀伤细胞,它们可直接杀伤肝细胞或由其分泌抗病毒的细胞因子发挥作用。乙型肝炎的免疫病理主要由T细胞免疫应答状态所决定。CTL识别HBV感染肝细胞表面的靶抗原后,执行两种不同的功能:杀伤小部分感染的肝细胞;分泌IFN一,和TNF一。,在肝细胞无损伤过程中清除病毒。辅助性T细胞应答(CD4‘T细胞)分为两种,Th,细胞和ThZ细胞。Thl细胞和ThZ细胞的平衡可能决定HBV感染的清除和病变的程度。Th,细胞和ThZ细胞的失衡在HBV慢性感染的发病机制中有重要意义。 本实验检测发现,慢性乙型肝炎组CD3+CD4+/CD3+CDS十百分率比CD3‘CDS‘百分率与对照组有显著性差异(p<0.01,p<0.05),乙肝病毒携带组CD3十CD4+/CD3‘CDS‘百分率比与对照组无显著性差异(p>0.05),CD3‘ CD4十百分率、CD3十百分率在慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组与对照组无统计学意义。CD3+CD4十/CD3十CDS‘百分率比、cD3+cDS牛百分率三组间有显著性差异(p<0.01,p<0.05)。 本实验检测结果与其他学者报导的有一致的,但也有学者报导CD3‘CD4+百分率与对照组相比降低,与本实验检测结果不同。本实验CD3十CDS+百分率升高,CD3十CD4‘/CD3斗CDS+百分率比降低,提示慢性乙型肝炎患者体内存在特异性CDS+T细胞免疫功能障碍。本实验结果CD3‘百分率在慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组与正常对照组无显著性差异,提示HBv侵人人体后,受染患者的成熟T细胞量无改变。有学者报导慢性乙型肝炎患者淋巴细胞活化、增殖、与凋亡共存,即一部分淋巴细胞在病毒抗原刺激下经活化增殖后凋亡,另一部分淋巴细胞在刺激下活化增殖。所以外周血T淋巴细胞总数可无变化。结论慢性乙型肝炎组CD3+CD4十/CD3‘CDS+百分率比降低、CD3‘CDS‘百分率升高与对照组有显著性差异,CD3+CD4‘百分率、CD3十百分率在三组无变化,慢性乙型肝炎患者体内存在特异的CDS‘T细胞免疫功能障碍。