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目的1.观察姜黄素（curcumin）刺激胃癌细胞SGC7901后，NF-κB通路相关因子IκBα在转录水平（mRNA）、蛋白水平的表达及IκBα磷酸化变化，NF-κB与其靶序列结合能力及其核定位的影响，初步探讨姜黄素对胃癌细胞SGC7901中NF-κB通路的影响。2.观察姜黄素（curcumin）对胃癌细胞SGC7901诱导后，胃癌细胞SGC7901中IL-1、IL-2、IL-4和Lin-28等因子在转录水平及蛋白水平的表达变化，从细胞微炎症角度探讨姜黄素（curcumin）抑制由LPS刺激胃癌细胞SGC7901引起的炎症。3.观察姜黄素（curcumin）对胃癌细胞SGC7901及采用RNA干扰（RNAi）方法沉默let-7a的胃癌细胞SGC7901（胃癌细胞SGC7901-let7a-）诱导后，胃癌细胞SGC7901中小分子RNA let-7a表达量的变化，探讨姜黄素诱导与let-7a表达量变化之间的关系。4.观察姜黄素（curcumin）刺激胃癌细胞SGC7901及胃癌细胞SGC7901-let7a-后，胃癌细胞SGC7901及胃癌细胞SGC7901-let7a-凋亡及集落形成能力的变化，姜黄素是否通过增加let7a的方式来发挥其抗癌作用。方法1.胃癌细胞SGC7901先用不同浓度的姜黄素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L]孵育10小时，然后用0.1μg/ml LPS处理1h，通过半定量逆转录PCR检测IκBα的mRNA表达水平，Western Blotting检测IκBα的蛋白表达水平及其磷酸化，电泳迁移率实验(EMSA）检测核因子-κB(NF-κB)与其靶序列结合能力。2.胃癌细胞SGC7901先用不同浓度的姜黄素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,30μmol/L,50μmol/L]孵育10小时，然后用0.1μg/ml LPS处理1h，通过半定量逆转录PCR检测IL-1、IL-2、IL-4and Lin-28等的mRNA表达水平，Western Blotting检测IL-1、IL-2、IL-4and Lin-28等的蛋白表达水平。3.由以上结果得出最适姜黄素浓度处理胃癌细胞SGC7901与胃癌细胞SGC7901-let7a-10小时，然后用0.1μg/ml LPS处理1h，通过Northern Blotting分析let-7a的表达量变化。4.用不同浓度姜黄素[0μmol/L(normal control),10μmol/L,50μmol/L]处理胃癌细胞SGC7901与胃癌细胞SGC7901-let7a-48小时，流式细胞术分析细胞凋亡及细胞集落形成刺激实验检测let-7a沉默对胃癌细胞SGC7901的影响。结果1.姜黄素可以显著地增加IκBα转录水平。结果表明LPS诱导1小时就可显著降低IκBα的水平，而30μM的姜黄素可以通过增加IκBα表达水平、抑制IκBα磷酸化来阻滞LPS介导的IκBα水平下降。蛋白杂交分析和免疫组化研究同样表明，姜黄素可以阻止LPS介导的p50/p65转核作用。0.1μg/mL LPS可以显著增加细胞核蛋白对于NF-κB DNA的结合。添加姜黄素处理后，LPS诱导的细胞核蛋白对于NF-κB DNA的结合效率明显降低。2.实验采用半定量逆转录PCR和蛋白杂交等方法检测相关转录因子的水平。本定量PCR的检测结果表明，LPS能显著增加IL-1、IL-2、L-4、STAT3和Lin-28的转录水平，而姜黄素可以以浓度依赖的方式，有效的降低LPS诱导的IL-1、L-4、TNFα、STAT3和Lin-28的转录水平，但对IL-2转录水平的影响不显著。蛋白杂交的结果同样显示，姜黄素能降低胃癌细胞SGC7901中这些癌症潜在激活因子（IL-1、IL-4、TNFα、STAT3和Lin-28）的蛋白水平。3. Northern杂交结果显示，反义RNA可以抑制let7a的表达。通过流式细胞分析发现，姜黄素诱导的细胞凋亡，随着细胞内let7a的表达抑制而降低。这表明let7a在姜黄素抗癌活性中起到重要的作用。结论姜黄素可以抑制NF-κB通路的激活。姜黄素抑制NF-κB通路，主要是通过特异性的激活表达，抑制IKK途径降低IκBα的降解，达到抑制NF-κB转移入细胞核的目的。抑制NF-κB通路在一定程度上可以达到抑制炎症和癌症发生的作用。本研究发现，姜黄素可以通过这种作用而达到抑制胃癌的作用。这种效果不仅与姜黄素抑制IκBα降解有关，而且与姜黄素增强IκBα表达水平有重要关系。姜黄素通过阻滞p50/p65进入细胞核实现抑制NF-κB通路介导的转录。本研究表明姜黄素还可以通过抑制一些原癌基因转录激活蛋白因子的表达（IL-1, IL-4,lin28, STAT3and TNFα来发挥抗癌作用。研究结果还进一步表明，MicroRNA let7a在姜黄素介导的抗癌活性中起到重要的作用。