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目的:随着对血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VEC)功能方面的深入研究,VEC功能障碍在动脉硬化疾病的发病机制中起着重要作用,例如:心血管和脑血管疾病等。血管内皮细胞具备多种功能,它参与人体内多种重要的平衡的调节,并且具备极强的代谢能力,细胞受损后可释放多种细胞活性因子,用以维持血管的舒张和收缩,在器官的缺血、炎症、免疫等一系列反应中起着重要的作用。同时它不仅对白细胞活性、血小板聚集中起着重要作用,同时对血液凝固亦起到重要的作用。为改善心脑血管疾病患者的预后,深入研究如何改善血管内皮细胞功能就显得尤为重要了。 血管性假血友病因子(vWF),在凝血过程中发挥重要作用。vWF在血中表达水平的高低与血管内皮细胞受损的程度呈正相关,目前被认为是反映VEC功能的最好指标[4]。替格瑞洛(Ticagrelor)于2012年底在中国大陆上市,它直接作用P2Y12受体,达到抑制血小板聚集的目的,且这种阻断具有可逆性。 研究证明,他汀类药物,比如辛伐他汀,可以改善血管内皮功能,这种作用是通过多种途径来实现的。替格瑞洛已经在急性心血管疾病的治疗中体现出来了优势,但由于替格瑞洛上市时间尚短,关于替格瑞洛除了抗血小板作用以外,是否也像他汀类药物一样,还具有改善内皮功能等的作用,国内外均研究尚少;同时,替格瑞洛联合他汀类药物治疗的同时,是否能加强他汀类药物调脂外的作用亦研究尚少。本实验将对其药物的多效性进行研究,将来可能会在心脑血管疾病及糖尿病血管病变的预防和治疗中提供新的思路。 方法:离体培养人脐静脉内皮细胞CRL-1730,以lxlO/mL接种于6孔板内,每孔为200ul。1、细胞复苏后,细胞传代培养2-3代,分别以浓度为0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的ox-LDL处理细胞24小时,观察细胞生长状态,并通过Western Blot印迹法测定细胞vWF的蛋白表达量,并依据测定结果选择最佳浓度的ox-LDL。2、根据第一步实验的结果,本实验选择 ox-LDL的诱导浓度为50ug/ml。实验分组:(1)空白对照组;(2)ox-LDL诱导组;(3)ox-LDL诱导+辛伐他汀干预组;(4)ox-LDL诱导+替格瑞洛(低浓度)干预组;(5)ox-LDL诱导+替格瑞洛(高浓度)干预组;(6)ox-LDL诱导+辛伐他汀与替格瑞洛联合干预组。24后采用Western Blot法测定vWF的蛋白表达水平。 结果: 1、根据Western Blot结果显示,50ug/ml、100ug/ml浓度的ox-LDL均能明显上调vWF的表达,高浓度(100ug/ml)ox-LDL组vWF的蛋白表达量明显高于50ug/ml组。但在显微镜下观察,100ug/mlox-LDL组的细胞状态较差,考虑到下一步还需要用药物进一步进行干预,故将选择50ug/ml浓度的ox-LDL进行诱导。 2、Western Blot结果显示,各 ox-LDL诱导组的vWF的蛋白表达明显高于非诱导组(空白对照组)(均p<0.05);在ox-LDL诱导组中,辛伐他汀组、低浓度替格瑞洛组及高浓度替格瑞洛组的vWF的蛋白表达均低于空白对照组,(均p<0.05);辛伐他汀与替格瑞洛联合干预组的vWF的蛋白表达均低于空白对照组、辛伐他汀组及替格瑞洛组(均p<0.05)。 结论:ox-LDL能提高vWF的蛋白表达;辛伐他汀及替格瑞洛均能下调vWF的蛋白表达,这种下调作用在一定范围内与浓度正相关;辛伐他汀与替格瑞洛联合较单独予辛伐他汀或替格瑞洛使下调 vWF的蛋白表达更为明显。因此我们可以得出结论,替格瑞洛在抗血小板的同时,还具有抗炎、改善血管内皮功能的作用,同时,辛伐他汀与替格瑞洛联合应用强于单独应用辛伐他汀或替格瑞洛的抗炎、改善血管内皮功能的作用。