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牛巴贝斯虫病（Bovine babesiosis）是由媒介蜱传播的巴贝斯虫科巴贝斯虫属的多种病原体寄生于牛的红细胞内所引起的血液原虫病的总称。本病以高热、贫血、黄疸和血红蛋白尿为主要特征,严重时常常引起发病动物死亡。目前对于牛巴贝斯虫的诊断主要还是通过显微镜检测到虫体来确诊,该方法直观,但也极易造成误诊,这给该病的诊断和预防带来了很大的困难。本研究主要针对以上情况,旨在建立一种特异、敏感、能够在感染早期对牛巴贝斯虫做出检测的血清学检测方法。将含有牛巴贝斯虫MSA-2c基因的质粒pGEX-4T-2转化到大肠杆菌BL21（DE3）。挑选出表达量高的克隆子,经IPTG诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B（GlutathioneSepharose 4B）纯化后,SDS-PAGE和Western-Blot分析结果表明,诱导表达的pGEX-4T-2/MSA-2c阳性菌株表达出大小为55kDa,具有反应活性的重组蛋白。ELISA试验显示,重组蛋白免疫的试验小鼠抗体效价可达1∶5,120,000以上,证明MSA-2c基因的重组蛋白可作为牛巴贝斯虫病检测的一种稳定的诊断工具。采用纯化的重组牛巴贝斯虫MSA-2c蛋白为检测抗原,辣根过氧化物酶（HRP）标记兔抗牛IgG为二抗,建立了牛巴贝斯虫MSA-2c间接酶联免疫吸附试验检测技术（MSA-2c-iELISA）。通过优化试验确定了最佳工作条件:抗原包被浓度为2.5μg/mL,4℃过夜,血清和酶标抗体分别作1∶20倍、1∶1000倍稀释,以0.05M/pH8.5的碳酸盐缓冲液为包被液,1%BSA/PBS-T为封闭液,0.1%BSA/PBS-T为稀释液,血清与酶标抗体的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物显色条件为室温20-25 min。收集无牛巴贝斯虫感染的健康小牛血清95份,分别最佳稀释,用已建立间接ELISA方法检测,根据统计学原理,OD450nm值＞（?）+3S的样品,可以将其判断为阳性。计算出95份血清的平均值（（?））=0.197,S=0.05。因此,样品的阴性、阳性的临界值=0.197+3×0.05=0.347。即样品判定标准为,样本OD450nm≥0.347时判为阳性;OD450nm值＜0.347时判为阴性。交叉试验表明重组MSA-2c抗原不与其它梨形虫阳性血清反应,有较强的抗原特异性。此法稳定性和重复性较好,批内、批间变异系数能控制在10%以内。多例血清检测结果表明,所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。