褪黑素和卵泡刺激素对雏鸡原始卵泡形成及发育的调节作用

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母鸡早期原始卵泡库建立是其后期高产蛋量的基础,研究母鸡原始卵泡形成及其调节可为雌鸡优良原始卵泡库建立奠定理论基础。本文研究了褪黑素和卵泡刺激素(FSH)两种激素对雏鸡早期卵泡发育的调节作用,并探索了其部分作用机理,其结果可为雏鸡早期卵泡发育的研究提供理论基础,有助于家禽原始卵泡发生及其发育的深入研究。  1.褪黑素对雏鸡早期卵泡发育的抑制作用  褪黑素对机体昼夜节律及与昼夜节律变化相关的激素分泌具有重要的调节功能,然而褪黑素对雏鸡早期卵泡发育的调节作用还不清楚。本实验在12日鸡胚发育至6d雏鸡过程中持续用褪黑素处理,然后检测雏鸡卵泡发育的变化。结果显示,褪黑素处理(100pg/d)显著降低左侧卵巢中生殖细胞和体细胞的增殖活性,从而降低生殖细胞或生殖细胞簇的数量,导致原始卵泡生成的数量减少。褪黑素处理后下丘脑内促性腺激素释放激素抑制激素(GnIH)mRNA的表达量增高,但促性腺激素释放激素(GnRH)-ⅡmRNA的表达量降低,垂体中FSH-β、卵巢内卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体(ER)、孕酮受体(PR)、芳香化酶(Cyp19a1)和3β-胆固醇脱氢酶(3βHSDⅡ)的mRNA表达量均显著降低。免疫印迹结果表明,细胞增殖核抗原及生殖细胞标记蛋白Dazl的表达量显著降低。因此可知,褪黑素可能通过抑制下丘脑-垂体-卵巢轴的相关激素合成和表达,从而抑制生殖细胞和体细胞的增殖,由此影响原始卵泡的形成。  2.卵泡刺激素与干细胞因子共同调节雏鸡原始卵泡的发育  原始卵泡形成依赖于生殖细胞簇破裂、体细胞增殖及分化的准确而有序地进行。目前有关FSH和干细胞因子(SCF)对蛋鸡卵巢组织中原始卵泡形成调节作用的研究较少。本实验采用FSH与SCF联合处理雏鸡的卵巢组织,研究了FSH和SCF对雏鸡卵泡发育的调节作用,并探讨了其作用机制。结果表明,体内注射FSH后,雏鸡卵巢皮质中原始卵泡形成的数量增加,且FSH处理导致KIT信号通路元件的表达量增加,同时细胞增殖活性增强、细胞周期蛋白CCND1和周期蛋白依赖性激酶CDK-2的表达量增加、细胞凋亡减少、E-钙黏蛋白减少、N-钙黏蛋白增加。这些结果提示,FSH对原始卵泡形成的促进作用存在多种途径。SCF与FSH联合处理培养的卵巢组织,结果显示SCF显著加强FSH对与原始卵泡形成相关信号或蛋白的调节作用。RNAi干扰实验显示,抑制SCF和c-KIT表达可抑制FSH对KIT信号的促进作用,说明FSH可通过SCF与c-KIT信号途径促进原始卵泡的形成。以上结果提示,FSH可通过SCF/KIT和钙黏蛋白等途径促进原始卵泡的形成,且SCF和c-KIT可与FSH相互作用来调节原始卵泡的形成。  以上结果表明,褪黑素通过降低下丘脑-垂体-卵巢轴的活性而抑制雏鸡生殖细胞发育和早期卵泡的形成;FSH通过调节细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及细胞黏附分子表达而促进雏鸡原始卵泡的发育。所得结果为雏鸡早期原始卵泡库建立的研究奠定了理论基础,也为提高蛋鸡繁殖力的研究提供了参考。
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