基因1型鸭甲肝炎病毒（DHAV-1）VP3基因编码的VP3衣壳蛋白是结构蛋白,针对VP3蛋白是与宿主细胞的何种蛋白相互作用的、是如何影响DHAV-1吸附宿主细胞以及如何诱导细胞凋亡等科学问题,开展的主要研究内容和结果如下:1兔抗DHAV-1 VP3 IgG阻断病毒吸附宿主作用研究分别将100μg兔抗VP3 IgG、兔抗DHAV-1 IgG和阴性兔IgG与200μL DHAV-1(5×10^6.6 copies/μL)混匀,37℃孵育1 h,接种到DEF中4℃分别吸附0 min、10 min、60 min、90 min和120 min,37℃静置2 min（使病毒渗透）,清洗未吸附病毒粒子后收集细胞样品,用荧光定量PCR检测吸附到DEF细胞表面的病毒拷贝数。结果显示,0⁶0 min DHAV-1吸附量逐渐增加,60 min达到最大,60¹20 min吸附量趋于平稳,且兔抗DHAV-1 VP3 IgG及兔抗DHAV-1 IgG处理组病毒吸附量显著低于未处理病毒。当不同剂量（10μg、100μg和200μg）的IgG处理DHAV-1后检测结果显示,兔抗VP3 IgG和兔抗DHAV-1 IgG处理过的病毒的吸附量显著减少,兔抗VP3 IgG的剂量在100μg阻断作用达到最大,同等条件下比兔抗DHAV-1 IgG的阻断作用弱。2外源性DHAV-1 VP3蛋白对DHAV-1的竞争性吸附抑制作用研究不同剂量（10μg、100μg和200μg）纯化的GST-VP3可溶性融合蛋白、GST标签蛋白和BSA分别与DEF在4℃孵育1 h,加入200μL DHAV-1(5×10^6.6 copies/μL)4℃再孵育1 h（使病毒吸附）后,37℃静置2 min（使病毒渗透）,收集细胞样品检测DEF细胞表面的病毒拷贝数。结果显示GST-VP3蛋白处理组的DEF病毒吸附量显著减少（P<0.05）,当GST-VP3蛋白达到100μg时竞争作用最大,但DHAV-1的吸附未被完全抑制,表明VP3蛋白对DHAV-1吸附到DEF细胞表面有竞争结合作用,但不是唯一能竞争结合的蛋白。3外源性DHAV-1 VP3蛋白激活DEF细胞凋亡因子caspase-3、8和9转录的研究通过RT-qPCR检测外源GST-VP3蛋白与DEF细胞4℃孵育2 h、4 h和8 h后细胞凋亡因子caspase-3、8和9的转录水平,结果显示,8 h后凋亡细胞因子caspase-3、8和9的转录水平上调较为明显（分别约4倍、2倍和1倍）。表明VP3蛋白在DEF胞外能激活细胞因子caspase-3、8和9的转录,且主要激活caspase-3。4 VP3真核表达重组蛋白诱导DEF凋亡的研究构建真核质粒pCAGGS/VP3并转染DEF 48 h后,用Western blot和IFA均检测到VP3-FLAG蛋白的表达。DAPI染色可观察到细胞核边移、皱缩和碎裂的现象;Tunel法检测观察到染成黄棕色的细胞核;流式细胞仪检测显示pCAGGS/VP3组总凋亡细胞比率显著高于pCAGGS对照组（P<0.05）。RT-qPCR检测到凋亡细胞因子caspase-3、caspase-8和caspase-9的转录水平分别上调约9倍、3倍和5倍。对caspase-3、8和9的酶活性检测结果显示它们的酶活性均有所提高（其中caspase-3增幅最大,caspase-9居中,caspase-8最小）。所以,VP3于DEF中表达后能够诱导DEF发生凋亡,且主要通过激活caspase-3诱导细胞凋亡。5 DHAV-1 VP3蛋白与DEF宿主互作蛋白的筛选鉴定构建真核质粒pCAGGS/VP3转染DEF 48 h后,将pCAGGS/VP3兔抗FLAG IgG IP组、pCAGGS/VP3普通兔IgG IP组和pCAGGS兔抗FLAG IgG IP组的蛋白胶条切下进行LC-MS/MS质谱测序,用兔抗人MyosinⅩ多克隆抗体和兔抗DHAV-1 VP3多克隆抗体进行免疫共沉淀验证,结果表明DHAV-1 VP3蛋白与DEF中MyosinⅩ蛋白存在相互作用。