基于p38MAPK、TLR4信号通路介导的炎性细胞因子网络探讨平肝养阴、活血通络法治疗高血压左心室肥厚研究

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第一部分临床研究目的:探讨平肝养阴、活血通络法治疗高血压LVH的临床疗效。方法:将72例高血压左心室肥厚患者随机分为观察组(36例)和对照组(36例),观察组给予口服以平肝养阴、活血通络为治法的复方钩藤降压片,对照组口服替米沙坦片,两组均以24周为1疗程,共观察1疗程,观察其血压、心率、中医证候积分、超声心动图IVST、LVPWT、LVDd、LVM. LVMI; E/A、IVRT、EDT指标,检测血浆高敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子α、白介素1p、白介素10、可溶性血管细胞间粘附分子-1。结果:(1)治疗24周后,观察组总有效率为83.33%,对照组总有效率为86.11%,两组比较,观察组与对照组降压疗效相当,差异无统计学意义(P>0.05);治疗24周后两组患者血压值、心率水平均有明显下降,与治疗前比较,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);但两组治疗后比较,差异无统计学意义(P>0.05);(2)治疗后中医证候疗效总有效率观察组为72.22%,对照组为52.78%,观察组总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)两组左心室肥厚指标比较,观察组治疗后IVST、 LVPWT、LVMI均较治疗前降低,观察组LVMI低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);两组LVDd治疗前后比较,均未见明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);(4)两组治疗后左心室舒张功能指标E/A、IVRT均较治疗前升高,观察组治疗后E/A高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);(5)两组治疗后炎性细胞因子血浆hs-CRP、TNF-α、sVCAM-1水平与本组治疗前比较均降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);对照组治疗后IL-1β水平与本组治疗前比较均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);两组治疗后IL-10水平与本组治疗前比较均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);但两组治疗后IL-10比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以平肝养阴、活血通络为治法的复方钩藤降压片能够降低高血压左心室肥厚阴虚阳亢、瘀血阻络证患者血压及心率,改善症状与体征积分作用,并能够降低血浆炎性细胞因子水平。第二部分实验研究目的:基于p38MAPK、TLR4信号通路介导的炎性细胞因子网络稳态失衡,探讨平肝养阴、活血通络法治疗高血压LVH的作用机制。方法:建立SHR左心室肥厚模型,随机分为SHR空白组、复方钩藤降压片组、替米沙坦组,及另设WKY组,监测各组大鼠血压、心率,采用Elisa法测定血浆血管紧张素Ⅱ、醛固酮、内皮素-1、高敏C反应蛋白、白介素1p、白介素-10、肿瘤坏死因子-α含量;通过蛋白-基因层面检测p38MAPK、TLR4信号通路介导的炎性细胞因子网络。结果:(1)血压:给药4周、8周、12周后,WKY组、复方钩藤降压片组、替米沙坦组均低于SHR空白组,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05);复方钩藤降压片组、替米沙坦组较给药前血压明显下降,差异具有显著统计学意义(P<0.01);但复方钩藤降压片组血压与替米沙坦组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)心率:SHR空白组较给药前心率明显上升(P<0.01);第8周、12周复方钩藤降压片组、及替米沙坦组较给药前心率下降;第12周复方钩藤降压片组心率低于替米沙坦组(P<0.05)。(3)血浆炎性细胞因子水平:治疗12周后各组血浆Hs-CRP、IL-β、 TNF-α比较,WKY组、复方钩藤降压片组、替米沙坦组均低于SHR空白组,差异具有显著统计学意义(P<0.01);而治疗12周后各组血浆IL-10比较,WKY组、复方钩藤降压片组、替米沙坦组均高于SHR空白组,差异具有统计学意义(P<0.01)。(4)左心室肥厚指标:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组及替米沙坦组左心室重量(LVM)均减低,差异具有统计学意义(P<0.05);复方钧藤降压片组左心室重量指数(LVMI)低于SHR空白组和替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);与SHR空白组相比,WKY组、复方钩藤降压片组及替米沙坦组左室壁相对厚度均减低,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(5)HE染色:WKY组心肌细胞少量炎性细胞浸润;SHR空白组心肌细胞弥漫性肥大,畸形、核大、深染,心肌纤维轻度水肿,排列紊乱,炎性细胞浸润明显;复方钩藤降压片组心肌细胞轻度肥大,心肌纤维排列较整齐,较少炎性细胞浸润;替米沙坦组心肌细胞轻度水肿,心肌纤维排列较紊乱,炎性细胞浸润较SHR空白组稍有改善。(6)Masson染色:WKY组心肌间质胶原无增生;SHR空白组部分心肌纤维坏死,心肌间质胶原增生明显;复方钩藤降压片组心肌间质胶原轻度增生;替米沙坦组心肌纤维排列较整齐,心肌间质胶原稍增生。(7)采用免疫组化法检测大鼠心肌细胞及蛋白表达体视学图像积分光密度分析比较:①p38MAPK:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有显著统计学意义(P<0.01);复方钩藤降压片组低于替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);②c-fos:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有显著统计学意义(P<0.01);③TNF-α:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有统计学意义(P<0.05);④IL-1:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有显著统计学意义(P<0.01);复方钩藤降压片组低于替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);⑤IL-10:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显升高,具有显著统计学意义(P<0.01);⑥LR4:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有显著统计学意义(P<0.01);复方钩藤降压片组低于替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);⑦F-κB:与SHR空白组相比,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均明显减低,具有显著统计学意义(P<0.01)。(8) Western-Blot法检测:(Dp38MAPK半定量检测结果比较,复方钩藤降压片组低均低于SHR空白组、替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);②TNF-α半定量检测结果比较,复方钩藤降压片组、替米沙坦组低于SHR空白组,差异具有统计学意义(P<0.05);③IL-1β半定量检测结果比较,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均低于SHR空白组,差异具有统计学意义(P<0.01);复方钩藤降压片组低于替米沙坦组,差异具有统计学意义(P<0.05);④IL-10半定量检测结果比较,复方钧藤降压片组、替米沙坦组均高于SHR空白组,差异具有统计学意义(P<0.05);⑤TLR4半定量检测结果比较,复方钩藤降压片组低于SHR空白组和替米沙坦组(P<0.01,P<0.05);⑥NF-κB半定量检测结果比较,复方钩藤降压片组、替米沙坦组均低于SHR空白组,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:(1)平肝养阴、活血通络治法能够在SHR模型上降低血压;(2)以平肝养阴、活血通络为治法的复方钩藤降压片能在一定程度上逆转左心室肥厚;(3)高血压左心室肥厚可能与p38MAPK、TLR4信号通路诱导的相关炎性细胞因子表达有关;(4)平肝养阴、活血通络治法治疗高血压左心室肥厚机制可能为:通过调控p38MAPK、TLR4信号通路,进而降低IL-1β、 TNF-α促炎细胞因子水平、升高IL-10抗炎细胞因子水平,抑制NF-κB表达,从而逆转左心室肥厚。
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