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第一部分榭皮素对布比卡因神经毒性损伤的保护作用目的:拟探讨榭皮素对布比卡因诱导的神经细胞损伤是否具有保护作用及其保护作用机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,并随机分成5组:对照组(C)、布比卡因处理组(B)、榭皮素处理组(Q)、榭皮素联合布比卡因处理组(Q+B)和咪拉地尔联合布比卡因处理组(M+B)。观察各组细胞形态,并采用MTT法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,以明确榭皮素是否对布比卡因所致神经毒性具有保护作用。同时采用流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测钙蛋白Cav3.1表达水平,以明确榭皮素的神经保护作用机制。结果:对照组(C)和榭皮素处理组(Q)相比细胞形态、细胞活力、细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度和钙蛋白Cav3.1含量均无明显统计学差异。布比卡因处理组(B)中细胞活力明显低于对照组(C),细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度和钙蛋白Cav3.1含量明显高于对照组(C)(P<0.01)。榭皮素联合布比卡因处理组(Q+B)以及咪拉地尔联合布比卡因处理组中(M+B)细胞活力明显高于单纯布比卡因处理组(B),细胞凋亡率、细胞内钙离子浓度和钙蛋白Cav3.1含量明显低于单纯布比卡因处理组(B)(P<0.01)。结论:本实验中,榭皮素能明显减少布比卡因引起的细胞凋亡,对布比卡因神经毒性有保护作用,同时榭皮素联合布比卡因组(Q+B)与单纯布比卡因组(B)相比,钙蛋白Cav3.1的表达和细胞内钙离子浓度都显著减少,这一结果也预示着T型钙离子通道在榭皮素的神经保护作用中起着一定的作用。第二部分榭皮素后处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响及可能机制目的:研究榭皮素后处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:健康雄性SD大鼠72只,体重200～250g,随机分为3组(n=24):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和榭皮素处理组(Q组)。采用夹闭双侧颈总动脉合并低血压法建立全脑缺血再灌注模型,Q组于再灌注后1h腹腔注射榭皮素20mg/kg,其他两组腹腔注射等容积的生理盐水。每组随机取6只大鼠于再灌注第三天采用跳台实验及Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能;在剩下的大鼠中每组随机取6只于再灌注24 h后HE染色光镜下观察海马CA1区锥体细胞损伤及TUNEL法观察细胞凋亡情况;再随机取6只于再灌注24h后干湿重法测定脑组织含水量及ELISA法测脑皮质中肿瘤坏死因子α(TNF-a)、白介素1β(IL-1β)及白介素10(IL-]0)含量;每组最后剩下的大鼠于再灌注24h后用荧光分光光度计和荧光显微镜方法分别检测脑组织血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)对伊文斯蓝(evansblue,EB)的通透性。结果:与S组比较,I/R组于水迷宫实验第1天至第5天、Q组于实验第1天至第3天逃避潜伏期延长,I/R组和Q组第1象限停留时间缩短;跳台实验中,I/R组反应时间、反应错误次数、逃避错误次数均增高,潜伏期缩短,Q组逃避错误次数增高;I/R组与Q组海马CAI区损伤明显,锥体细胞凋亡指数、EB含量、脑组织含水量及TNF-α IL-lβ含量升高,IL-10含量降低(P<0.01);与I/R组比较,Q组于水迷宫实验第1天至第5天逃避潜伏期缩短,第1象限停留时间延长(P<0.05);Q组跳台实验中反应时间、反应错误次数、逃避错误次数均降低,潜伏期增长(P<0.05);Q组大鼠海马CA1区细胞形态学损伤减轻,锥体细胞凋亡指数、EB含量、脑组织含水量及TNF-α、IL-1β含量降低,IL-10含量增高(P<0.01)。结论:榭皮素后处理可改善全脑缺血再灌注大鼠的损伤及认知功能,且可降低BBB通透性,减轻脑水肿,其机制可能与抑制炎症反应有关。