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研究表明日粮蛋白质水平过高过低均可导致断奶仔猪腹泻,但机理还不完全清晰。水通道蛋白作为机体各器官水转运的重要功能性蛋白,与饲粮蛋白质水平所致腹泻间应该有着紧密联系,然而鲜有相关报道。本研究选取96头25日龄断奶仔猪,随机分为4组,适应饲养7d后分别饲喂18%、20%、22%和24%蛋白水平饲粮,在饲喂后的6h、24h及72h时每组随机选取4头麻醉后屠宰,分别采其空肠、回肠、近端结肠及远端结肠,通过荧光定量RCR(qRT-PCR)对断奶仔猪肠道部分水通道蛋白(AQP,aquaporin)的基因水平进行检测,同时运用免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学从蛋白质水平对仔猪肠道水通道蛋白进行分析,并对其表达部位进行定位。结果表明:(1)小肠AQP4蛋白表达量检测试验结果显示:除72h外,其余时间点较高蛋白质水平组(22%和24%组)断奶仔猪小肠AQP4蛋白表达量均极显著低于20%组(P<0.01);饲喂72h时,18%组小肠AQP4蛋白表达量极显著低于其他三组(P<0.01)。(2)小肠AQP4 mRNA相对表达量检测结果显示:在空肠中,20%组仔猪AQP4 mRNA含量除在6h与18%无显著差异外(P>0.05),在各个时间点均显著或极显著高于其他三组(P<0.05或0.01)。回肠中,6h及24h时,20%组仔猪AQP4 mRNA含量均高于22%和24%组(P<0.05或0.01);72h时,较高蛋白质水平组(22%和24%组)AQP4 mRNA含量均上升至极显著高于20%组水平(P<0.01)。(3)小肠免疫组化结果显示:AQP4主要分布在空肠和回肠肠绒毛吸收细胞周围,少量表达在肠道绒毛内部吸收细胞下方。(4)结肠水通道蛋白相对表达量检测试验结果显示:饲喂6h后24%组结肠AQP2蛋白表达量极显著高于其他三组(P<0.01);24h时20%组显著或极显著高于其他三组(P<0.05或0.01),72h时各组间AQP2蛋白表达量无统计学意义(P>0.05)。6h时,20%组仔猪结肠AQP4蛋白表达显著或极显著低于其他三组(P<0.05或0.01);24h和72h时20%组表达量上升至最高。24%组仔猪结肠AQP9蛋白表达量在三个时间点均极显著或显著低于其他三组(P<0.05或0.01);72h时20%组表达量为四组中最高,显著高于18%组(P<0.05),极显著高于24%组(P<0.01),与22%组无显著差异(P>0.05)。(5)结肠水通道蛋白mRNA相对表达量检测结果显示:在近端结肠中,除24h外,20%组AQP2 mRNA含量均极显著高于其他三组(P<0.01),24h时18%组极显著高于其余三组(P<0.01);6h时,22%组仔猪AQP4 mRNA含量极显著高于其余三组(P<0.01),其他两个时间点时20%组AQP4 mRNA含量均为四组中最高;18%组仔猪AQP9 mRNA含量在三个时间点均为四组中最高,72h时20%组极显著低于其他三组(P<0.01)。在远端结肠中,24%组的AQP2 mRNA含量在三个时间点均极显著高于20%组,24h及72h时20%组与18%间无显著差异;20%组AQP4 mRNA含量在各个时间点均高于18%及22%组,在24h时极显著高于24%组(P<0.01),其余时间点与24%组无显著差异(P>0.05);除6h外,20%和22%组AQP9 mRNA含量均极显著高于其他两组(P<0.01),6h时18%及22%组间无统计学意义(P>0.05)。(6)免疫组化图片显示:AQP2及AQP4主要表达在结肠肠绒黏膜上部柱状细胞周围,少量表达在肠绒毛固有层内;AQP9主要表达在结肠黏膜柱状细胞及杯状细胞上。结论:AQP4在空肠和回肠中主要表达在肠绒毛吸收细胞周围,在结肠中主要表达在结肠肠绒黏膜上部柱状细胞周围,少量表达在肠绒毛固有层内;AQP2在结肠中主要表达在结肠肠绒黏膜上部柱状细胞周围,少量表达在肠绒毛固有层内;AQP9主要表达在结肠黏膜柱状细胞及杯状细胞周围。本试验条件下,日粮蛋白质水平高于或低于20%均不利于断奶仔猪小肠AQP4,结肠AQP2、AQP4、AQP9正常表达,不利于维持仔猪肠道水分吸收及分泌的平衡;20%蛋白水平的仔猪饲粮有利于维持断奶仔猪小肠AQP4,结肠AQP2、AQP4和AQP9稳定表达。