本实验旨在通过对临床乳腺肿瘤患犬的组织样本和血液样本进行组织病理学分析及甲基化检测，探究犬乳腺肿瘤的发生与甲基化的关系。与此同时，以犬乳腺肿瘤细胞系CHMm为对象，探求5-氮杂胞苷对犬乳腺肿瘤细胞的有效药物浓度和作用时间以及对其甲基化及相关基因表达的影响。将收集的24例临床组织样本制成石蜡切片进行HE染色，分析其肿瘤类型。同时提取患犬血液（24例）及乳腺肿瘤细胞CHMm基因组DNA，通过亚硫酸氢钠的修饰及纯化，应用甲基化特异性PCR（MSP）检测血液和细胞中DAPK1基因和MGMT基因的甲基化状态。以体外培养犬乳腺肿瘤细胞系CHMm为模型，首先以MTT法检测不同药物浓度（0.25μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）作用24h、48h、72h后对细胞增殖的影响，计算细胞生长抑制率，确定有效药物浓度及作用时间。进而以不同浓度的5-氮杂胞苷处理犬乳腺肿瘤细胞一定时间后，用实时荧光定量PCR分别检测细胞DAPK1、MGMT、BRCA2、P27及CyclinD1基因mRNA的表达情况。结果：1.通过病理学分类，24例组织样本中良性肿瘤11例（45.83%），恶性肿瘤13例（54.17%）；细胞及血液样本中DAPK1基因和MGMT基因均发生了甲基化，其中细胞及9例恶性肿瘤血液样本中DAPK1基因和MGMT基因完全甲基化（37.50%），4例恶性肿瘤血液样本和9例良性肿瘤血液样本发生不完全甲基化（54.17%），2例良性肿瘤血液样本未发生甲基化（8.33%），结果显示犬乳腺肿瘤DAPK1基因和MGMT基因存在明显的甲基化现象。2.细胞生长抑制率检测显示不同作用时间各个药物浓度都能够对细胞起到一定的生长抑制效应，抑制强度呈现时间与浓度依赖性，随着作用时间的延长和药物浓度的增加，抑制率逐渐增大，并以1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L及50μmol/L为实验药物浓度，作用时间72h。3.用不同浓度的5-氮杂胞苷作用于犬乳腺肿瘤细胞处理72h后，用实时荧光定量分别检测细胞DAPK1、MGMT、BRCA2、P27及CyclinD1基因mRNA的表达情况，结果显示，DAPK1、MGMT、BRCA2、P27基因mRNA表达随药物浓度的增大逐渐升高，CyclinD1基因mRNA表达随药物浓度的增大逐渐降低，高剂量实验组与对照组比较差异极显著。