睡眠呼吸暂停综合征(SAS)最早报道于上个世纪五十年代,后随着其发病率逐年上升,引起了越来越广泛的重视。根据多导睡眠监测结果,SAS可以分为阻塞性、中枢性、混合性三种类型,三者发病机制及临床表现有一定的差异。流行病学显示,在成年人群中以阻塞性最多见。OSAS发病机制复杂,主要与解剖因素、神经-体液因素有关,解剖因素主要指患者上气道解剖结构存在不同程度的狭窄,这种狭窄存在于患者静止状态时,并且于睡眠状态下狭窄程度加剧;神经-体液因素主要包括患者各种内分泌紊乱如甲状腺功能减退等。OSAS导致的主要病理生理学特征是夜间反复的间歇低氧(IH)与持续的高碳酸血症。OSAS危害巨大,其导致的危害不仅局限与疾病本身,更多的是在于在其病理生理学上导致的全身多个系统并发症。OSAS常见的并发症包括心血管系统、呼吸系统、内分泌系统等在内多个系统疾病。近几年的研究发现,OSAS患者合并肿瘤机率、病死率不同程度的提高,且致肿瘤病情进展迅速。对此,有学者推测OSAS导致的IH可能是促进肿瘤发生发展、肿瘤细胞增殖的重要危险因素之一。肿瘤发生发展过程中伴随着不同程度的上皮间质化(EMT)、氧化应激、炎症反应等事件,OSAS模式IH能否对肿瘤发生发展过程中的这些参与事件产生影响,其中详细机制并不十分清楚。本研究以人肺癌A549细胞与小鼠黑色素瘤B16F10细胞为研究对象,模拟间歇低氧环境,建立肿瘤细胞-间歇低氧模型,以研究OSAS模式IH对肿瘤细胞相关蛋白表达及生物学行为的影响,并探讨其中机制,以希望能够为防治肿瘤提供新的思路和措施。目的1.探索OSAS模式IH对人肺癌A549细胞HIF-1α与YAP及P-YAP蛋白表达的影响。2.探索OSAS模式IH对小鼠黑色素瘤B16F10细胞NF-κB、NRF2及MMP-9蛋白表达的影响。方法分别以人肺癌A549细胞与小鼠黑色素瘤B16F10细胞为对象,进行正常细胞培养后,进行IH环境培养舱暴露。IH环境培养舱的环境设置为低氧5mins、复氧5mins,并根据需要设置低氧-复氧循环。舱内最低氧状态时氧气浓度控制在5%左右,复氧时舱内氧气浓度控制在21%左右。暴露时长分别设置为1h、3h、6h、据此分为IH1组(IH1)、IH3组(IH3)、IH6组(IH6),并采用置于正常细胞培养箱内培养的细胞作为对照组N组(N)。采用Western-blot法检测人肺癌A549细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、YAP、P-YAP蛋白表达水平,q RT-PCR法检测HIF-1α、YAP m RNA的表达水平。采用Western-blot法检测小鼠黑色素瘤B16F10细胞氧化应激核转录因子相关因子-2(NRF2)、炎症相关核转录因子NF-κB、IκBα、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果1.HIF-1α和YAP及P-YAP表达Western blot结果显示H1、IH3、IH6组HIF-1α蛋白表达较N组均出现增高,且有大体上随着IH处理时间的增长,而表达逐步增高的趋势。IH1、IH3、IH6组YAP蛋白表达较N组均出现增高,且其增高的趋势与IH处理时间呈时间依赖关系。IH1、IH3、IH6组P-YAP蛋白表达较N组均增降低,且降低趋势与IH处理的时间亦有时间依赖性。q RT-PCR结果显示IH1组(2.91±0.04)、IH3组(5.69±0.17)HIF-1αm RNA的相对表达量较N组(1.01±0.05)均显著增高(P<0.05),IH6组(9.18±0.59)HIF-1αm RNA的相对表达量较N组极显著增高(P<0.01),并且发现细胞中HIF-1αm RNA的相对表达量与IH处理的时间呈依赖关系。IH1组(2.50±0.18)、IH3组(4.07±0.25)YAP m RNA的相对表达量较N组(1.00±0.01)均显著增高(P<0.05),IH6组(9.18±0.58)YAP m RNA的相对表达量较N组有极显著增高(P<0.01),并且发现细胞中YAP m RNA的相对表达量与IH处理的时间呈依赖关系(P<0.05)。2.NRF2、NF-κB P65、IκBα、MMP-9蛋白表达与N组相比,IH1组、IH3组、IH6组NRF2蛋白的表达出现了显著的升高趋势。与N组相比,IH1组、IH3组、IH6组NFκB P65蛋白的表达出现了显著的升高趋势。与N组相比,CH组、IH组IκBα蛋白的表达均出现了显著的降低趋势。且并且IH暴露时IκBα蛋白的降解程度要高于CH暴露时。与N组相比,IH组MMP-9蛋白的表达出现了显著的增高。结论1.OSAS模式IH可以促进人肺癌A549细胞内HIF-1α、YAP高表达,P-YAP蛋白低表达;并且促进了HIF-1αm RNA表达上升、YAP m RNA表达上升。提示Hippo-YAP信号通路失调可能是OSAS患者合并肿瘤患者风险增加、病情进展加快的原因之一。2.OSAS模式IH可以促进小鼠黑色素瘤B16F10细胞内NRF2高表达,提示OSAS合并肿瘤患者,病情进展较快可能与OSAS导致的氧化应激事件有关3.OSAS模式IH可以促进小鼠黑色素瘤B16F10细胞内NF-κb p65高表达,还可以促进Lewis小鼠肺癌细胞中IκBα蛋白低表达。提示炎症反应在OSAS患者合并肿瘤风险增加过程中发挥了重要作用。4.肿瘤细胞-低氧模型中发现Lewis小鼠腺癌细胞内MMP-9蛋白表达升高,提示间歇低氧可以促进肿瘤浸润转移。