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苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）是研究最深入、使用最广泛的一种杀虫微生物，在生物防治中占有极其重要的地位。几丁质酶（Chitinase，EC 3.2.1.14）能够分解作为真菌细胞壁和昆虫围食膜主要成分的几丁质，具有重要的生防价值。研究苏云金杆菌几丁质酶对开发Bt的新资源、改良Bt制剂具有重要意义。 从本室分离保存的64株苏云金杆菌中，利用几丁质平板筛选到4株能产几丁质酶的菌株。其中WB-50的几丁质酶活性最高。对它的产酶条件进行了研究，结果表明：在pH7.0的基础培养基中添加2.0％的细粉几丁质、1.0％的酵母膏，在220rpm、30℃条件下培养72h，几丁质酶的产出最大。 根据GenBank上登录的Bt subsp．pakistani的几丁质酶基因chi和Bacillus cereus的几丁质酶基因chiB序列的同源性，设计出可扩增部分几丁质酶基因的一对引物BFL1／BFL2，以WB-50的总DNA为模板，利用PCR扩增出部分几丁质酶基因序列。将PCR产物纯化回收后直接测序，经在线的Blast软件进行同源性分析表明：它与chiB的相应部分的同源性将近100％。根据这一结果，可利用引物BFL1／BFL2来鉴定Bt的几丁质酶基因，在所鉴定的另外22株苏云金杆菌中有18株具有几丁质酶基因。这个比例大大超过了利用几丁质平板筛选到产几丁质酶菌株的比例。再利用chiB基因序列设计出扩增全长几丁质酶基因的一对引物QCL1／QCL2，其中QCL1包含了BamHI的酶切位点，得到了包含全部氨基酸信息的几丁质酶基因，命名为chiA。Southern杂交证实了这一结果。利用PCR产物克隆载体pGEM-T easy vector与chiA连接，构建出重组克隆载体，定名为pT-CHI。再将pT-CHI用BamH I和EcoR I双酶切，与用相同酶切的原核表达载体pGEX-2T连接。重组质粒命名为p2T-CHI。在IPTG的诱导福建农林大学硕士学位论文下，pZT（HI的几丁质酶A与谷眺甘肋转移酶的融合基因得到了表达，SDS－PAGE实验证实了这一结果。