流感是由流感病毒引起的一类常见的急性传染性疾病,在历史上曾给人类带来沉重的损失,至今流感仍是冬春季节的高发疾病,威胁着人类的生命健康。除了抗流感药物的开发,快速有效的检测方法在流感病毒防治中同样重要。目前的流感病毒检测方法主要有病毒分离培养、荧光PCR、ELISA法、胶体金法等,但现有的方法分别存在耗时长、成本高、需要专业操作的不足。神经氨酸酶(neuraminidase,NA)是流感病毒表面的一种主要蛋白,具有对唾液酸糖苷键的识别和切断的能力。神经氨酸酶能够切除呼吸道粘膜表面唾液酸残基以及帮助新组装的流感病毒从宿主细胞表面释放,在流感病毒的传播与复制中起到关键作用。本课题设计合成了唾液酸化恶唑烷,针对流感病毒神经氨酸酶进行流感病毒的检测。该化合物可以被流感病毒神经氨酸酶识别并水解其氧苷键,其水解产物N-羟乙基吲哚衍生物在肉眼观察时呈现红色,同时可以在特定激发波长下可以发射最大吸收波长为558 nm的荧光,利用这两种光学性质可以进行流感病毒的检测。本课题以唾液酸为起始原料,进行羧基的甲酯化反应、羟基的乙酰化反应、唾液酸C-2位的氯代,再以对羟基苯甲醛的羟基与唾液酸形成糖苷键,以醛基与吲哚并恶唑形成烯键,经过7步反应得到终产物。使用该化合物对一系列不同血凝单位(HAU)的流感病毒进行检测,其肉眼检视下和荧光检测下的检测限分别为21 HAU和2-2 HAU。实验结果表明唾液酸化恶唑烷对于流感病毒的检测限与商品化试剂盒具有可比性,且制备更加简便、成本更低、易于操作;借助酶标仪等检测仪器,可以实现更高的检测效率和更低的检测限。针对目前突变型流感病毒NA对部分神经氨酸酶抑制剂类药物产生耐药性的特点,本课题设计实验将唾液酸化恶唑烷与神经氨酸酶抑制剂奥司他韦羧酸盐联合使用,以区分耐药型流感病毒。实验结果显示该方法能够有效地区分耐药型NA,可以应用于耐药株流感病毒的检测。