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奶牛乳腺炎是奶牛业常见和多发疾病,每年在全球都引起巨大的经济损失。无乳链球菌(S. agalactiae)和金黄色葡萄球菌(S. aureus)是引起奶牛乳腺炎的两种重要的病原菌,目前尚无针对两种菌引起的奶牛乳腺炎的有效疫苗。Sip和GapC是无乳链球菌两个高度保守的表面蛋白,C1fA蛋白是金黄色葡萄球菌表面高度保守的粘附蛋白,三者均有望作为研究奶牛无乳链球菌或金黄色葡萄球菌型乳腺炎的抗原靶标。本研究以小鼠为模型,评价Sip、GapC和重组蛋白rSip-C1fA的免疫原性及其对小鼠乳腺的保护力,为研制奶牛无乳链球菌、金黄色葡萄球菌型乳腺炎疫苗奠定基础。从本实验室分离的奶牛乳腺炎无乳链球菌和金黄色葡萄球菌临床分离株中选取毒力最强株,以无乳链球菌基因组为模板扩增Sip及GapC的基因片段、金黄色葡萄球菌基因组为模板扩增C1fA基因片段。对Sip及GapC基因分别构建表达载体并进行原核表达；同时运用软件分析Sip和C1fA的抗原表位,将二者主要的抗原区段进行嵌合表达。将表达纯化的三种蛋白分别加白油佐剂(v：v=1：1.5)乳化,制成亚单位疫苗,并分别免疫小鼠,免疫完成后对小鼠乳腺进行灌注攻毒实验。免疫后血清IgG水平显示：(1)Sip、GapC蛋白免疫组的免疫血清IgG水平均显著的高于灭活无乳链球菌免疫组；(2)rSip-C1fA免疫组的免疫血清IgG水平同时显著性的高于灭活无乳链球菌及灭活金黄色葡萄球菌免疫组。所有蛋白免疫组产生的IgG均以IgGl型为主,而灭活苗组的血清IgG亚型中IgG1和IgG2a的含量无明显差别。免疫血清调理中性粒细胞吞噬细菌实验显示,Sip、GapC蛋白免疫组的免疫血清能够比灭活无乳链球菌免疫组调理中性粒细胞吞噬更多的无乳链球菌(P <0.05); rSip-C1fA免疫组的免疫血清同时比灭活无乳链球菌、灭活金黄色葡萄球菌免疫组吞噬更多的无乳链球菌或金黄色葡萄球菌(P<0.05)。攻毒后,亚单位疫苗组的小鼠乳腺细菌回收数量均显著的低于灭活苗及PBS组。另外小鼠乳腺切片显示,亚单位疫苗组与灭活苗组相比：小鼠乳腺均保持完整的乳腺结构,均只有少量的中性粒细胞浸润。这些研究结果表明了三个蛋白均具有良好的免疫原性,免疫小鼠后均对小鼠乳腺产生了良好的保护效果；特别是rSip-C1fA蛋白,能够同时对无乳链球菌及金黄色葡萄球菌型小鼠乳腺炎提供良好保护力,为研制奶牛乳腺炎的广谱苗提供了新思路。