研究背景： 胰腺癌是高度恶性肿瘤之一。吉西他滨单药化疗是晚期胰腺癌标准一线治疗，其疗效不理想。究其原因之一是胰腺癌化疗敏感性低。前期研究我们发现MDR-1和RRM1在SW1990对吉西他滨化疗抵抗中发挥重要的作用。另外，晚期患者出现贫血多见，输血或使用促红细胞生成素(Epo)是改善血红蛋白水平的有效措施。 Epo主要是通过促进红细胞的生成，提高患者的血红蛋白的浓度，减少临床输血，达到改善肿瘤患者的生活质量，进而提高肿瘤的控制率以及患者的生存期。然而Ⅲ期临床试验发现多种肿瘤患者使用重组人红细胞生成素后无病生存期及总生存期均下降。2007年FDA发布警告：建议慎用Epo治疗癌性贫血。尽管如此，还是有不少研究发现Epo不会恶化肿瘤患者的生存。研究发现促红细胞生成素受体(EpoR)不仅存在红系祖细胞胞膜上，而且多种肿瘤细胞同样表达EpoR。体内体外研究还发现EpoR在肿瘤细胞中可能有功能性表达，影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、化放疗敏感性以及肿瘤细胞的远处转移能力。 鉴于目前Epo对肿瘤治疗的影响尚不确定，而报道Epo对胰腺癌细胞株产生影响的相关研究较少，通过体外实验检测胰腺癌细胞中是否表达EpoR以及EpoR是否存在功能，可能将为临床合理应用Epo提供一定的实验依据。 研究目的： 观察促红细胞生成素对胰腺癌细胞株SW1990增殖活性和吉西他滨化疗敏感性的影响，并初步探讨其中可能的机制。 材料和方法： 1.材料 1)SW1990胰腺癌细胞株购于中山大学动物中心 2)主要试剂：RPM1640干粉培养基(Gibico-BRL公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，胰蛋白酶(Amresco公司)，重组人红细胞生成素注射液(麒麟鲲鹏中国生物公司惠赠)，兔抗人EpoR抗体(Santa Cruz公司)，吉西他滨(美国礼来公司惠赠)，四氮唑盐(Sigma公司)，二甲基亚砜(Sigma公司)，Trizol(invitrogen公司)，逆转录试剂盒(TakaRa)，PCR酶(TakaRa)，DAB显色试剂盒等。 3)主要仪器：Wellscan MK3自动分析酶标仪(Labsystem Dragon，美国)，梯度PCR仪(Biomeera，德国)，凝胶成像仪(BXT-20-M)，各种显微镜等2.方法免疫细胞化学法检测SW1990中EpoR的表达，MTT法检测Epo对SW1990细胞增殖以及吉西他滨化疗敏感性的影响，RT-PCR法检测Epo对MDR-1、RRM1在SW1990中表达的影响。对各作用组的光密度值、抑制率以及MDR-1/β-actin和RRml/β-actin比值进行多组数据的方差分析；并对化疗敏感性(抑制率)与肿瘤化疗抵抗相关基因表达强度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actinLg值)进行直线相关性分析；对吉西他滨化疗抵抗浓度与肿瘤化疗抵抗相关基因表达强度(MDR-1/β-actin或RRml/β-actin比值)进行直线相关性分析。所有统计过程均由SAS8.0软件完成。 结果： 1)EpoR在SW1990细胞中表达。显微镜下，棕褐色物质主要分布在细胞膜上。 2)0-10U/mlEpo作用组的0D630平均值分别是0.597，0.645，0.690，0.630，差别无统计学意义(P=0.377)。 3)2—10U/mlEpo处理组吉西他滨对SWl 990的抑制率平均值分别是35.6％、33.1％、29.9％，明显低于对照组的64.0％，P=0.004。不同浓度Epo处理组抑制率相近，差别无统计学意义(P>0.05)。 4)0-10U/mlEpo作用组的MDR—1/β—actin比值分别是0.42，0.58，0.60，0.68；RRMl/β—actin比值分别是1.32，1.64，1.57，1.67。方差分析发现Epo处理组的MDR-1、RRM1基因表达均明显高于对照组。P值分别是0.012，0.029。但是，Epo处理组之间差别无统计学意义，p>0.05。 5)直线相关性分析得出，Epo作用后，吉西他滨对SW1990的抑制率与IdDR-1/β—actin和RRml/β—actin的灰度比值均成负相关，相关系数分别是-0.964(p=0.036)和-0.968(p=0.032)。 6)直线相关性分析发现胰腺癌细胞吉西他滨化疗抵抗浓度与MDR-1/β—actin和RRml/β—actin的灰度比值均呈现相关性，相关系数分别是0.960(p=0.002)和0.966(p=0.002)。 结论1)胰腺癌细胞株SW1990表达EpoR； 2)Epo似不能刺激SW1990增殖，但是降低SW1990对吉西他滨的化疗敏感性； 3)Epo可能通过上调MDR-1、RRM1导致降低SW1990对吉西他滨的化疗敏感性。