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胆汁酸及其受体研究是目前国内外研究的热点领域。目前发现胆汁酸通过作用其受体FXRα和TGR5发挥调节机体内分泌、免疫功能及能量代谢等多种药理作用。牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)是胆汁酸的一种重要有效成分,以往研究发现其具有调节小鼠机体免疫功能的作用,本研究为了进一步揭示其免疫调节机理,开展了TCDCA对小鼠免疫器官及巨噬细胞系RAW264.7促增殖和抗凋亡作用的研究。本论文主要研究内容及结果如下:
在体内实验中,将小鼠随机分为4组,即正常组,正常给药组,地塞米松(DEX)诱导模型组,模型给药组,其中TCDCA的给药剂量设为0.1g/kg。采用HE染色检测免疫器官的病理组织变化,EDU标记法检测免疫器官细胞增殖反应,TUNEL法检测免疫器官的细胞凋亡。病理图片显示给药组比模型组病理变化明显减轻,并趋于正常组。EDU结果表明正常给药组与正常组相比较,细胞增殖指数极显著的增加,即TCDCA对小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结的细胞增殖均具有极显著的促增殖作用;而模型给药组与模型组相比较,细胞增殖指数显著的增加,即TCDCA对模型小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结的细胞增殖均具有显著的促增殖作用。TUNEL结果表明给药组与模型组相比较,凋亡指数显著降低,即TCDCA对小鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结的细胞凋亡均具有极显著的抗凋亡作用。
在小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7上,采用CCK-8试剂盒检测了TCDCA对RAW264.7增殖反应,以及与LPS共刺激的RAW264.7细胞的增殖反应。结果表明无论TCDCA单独还是与LPS协同刺激均能显著地促进RAW264.7细胞的增殖。荧光定量方法检测了TCDCA对周期蛋白基因的mRNA表达的影响,表明不同剂量的TCDCA,对周期蛋白CyclinDl、CyclinEl、CyclinAl、CDK2mRNA的表达具有不同程度的促进作用。采用二苯胺方法检测了。TCDCA对DEX诱导的RAW264.7细胞凋亡的影响,结果表明与模型对照组相比TCDCA能够降低DEX诱导的小鼠单核巨噬细胞DNA片段化的百分率,即抑制DEX诱导的小鼠RAW264.7细胞凋亡,但具有剂量依赖性。荧光定量检测TCDCA对凋亡抑制蛋白基因mRNA表达的影响表明,TCDCA能不同程度的提高凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2、XIAPmRNA的表达。
综上本课题可得出如下结论:TCDCA对小鼠免疫器官及巨噬细胞系RAW264.7细胞具有促增殖和抗凋亡作用。同时TCDCA能上调周期蛋白基因及凋亡抑制蛋白基因mRNA的表达。