论文部分内容阅读
研究了银杏种子发育过程的解剖结构以及银杏种子的内生菌。对银杏种子内生菌的研究包括：分离并鉴定银杏种子的内生菌类型，将得到的内生菌进行抑菌以及产酶活性的初步筛选。主要研究结果如下：一、银杏胚珠的发育的解剖结构1）观察到授粉后不育胚珠的珠心基部出现退化组织区。珠心基部组织的退化形成对珠心中雌配子体发育的水分或营养供应减弱或终止，使胚珠停止继续发育。2）认为银杏胚珠的传粉滴，是或主要是珠心顶端组织解体形成贮粉室时产生的汁液溢出形成。3）胚乳与珠心组织之间存在一非细胞性的膜质层，该膜质层可能来自大孢子后壁。在胚乳发育中，珠心组织不消失而最终成为胚乳的膜状包被层，该被层在种子前半部分的种腔处，与种皮隔于种腔而分离；在种子下半部分与种皮（内种皮）紧密连合。4）珠被分化为肉质的外种皮、骨质的中种皮和膜质的内种皮；但内种皮在分化早期在种子前端的种孔和种腔周围明显增厚，含较多汁液，可能为胚乳的发育提供一部分营养。种腔的功能可能是积聚从种孔来的水分以维持种子的萌发。二、银杏种子的内生菌的分离和鉴定在银杏种子中共分离出7株内生菌，包括5株内生细菌，2株内生放线菌。三、银杏种子的内生菌抗菌活性初步筛选采用平板对峙法对7个菌株进行8种病原真菌拮抗活性的筛选，其中KLBMP3491和KLBMP3496两株菌对所有指示病原菌均具有一定程度的抑制作用。四、对从银杏种子中分离得到的内生菌产酶活性进行初步筛选1）从已获得的菌株中筛选到一株内生细菌，编号为KLBMP3495，其产纤溶酶和纤维素酶的活性均很高，经鉴定为枯草芽孢杆菌。2）对KLBMP3495的酶学特征进行了研究，结果表明纤溶酶作用时的最佳温度是35℃，最适酸碱度为8.0；CMC酶反应的最适温度为55℃，最适pH为7.0。Native-PAGE表明菌株KLBMP3495发酵液具有纤溶酶和CMC酶活性。3）采用单因子和正交试验相结合的方法，对KLBMP3495的发酵培养基和发酵条件进行了优化实验。结果显示，内生菌产纤溶酶的最佳培养基的营养成分为：蔗糖1.5%、玉米粉0.5%、KNO30.5%、黄豆粉饼1.5%；最佳培养条件为初始pH8.0，温度35℃，转速为160r/min，种子液的接种量2%，装液量为60mL/250mL，菌体培养时间为90h。纤维素酶的最佳液体发酵培养基的组成成分为CMC-Na1.0%、玉米粉0.5%、NH4NO30.3%、黄豆粉饼2%；培养条件为pH7.5，培养温度40℃，转速160r/min，种子液的接种量4%，装液量40mL/250mL，培养时间75h。在此条件下培养，KLBMP3495的纤溶酶活性从起始的320.5U/mL提高到739.7U/mL，KLBMP3495的纤维素酶活性从起始的178.11U/mL提高到609.5U/mL。