初筛调控残粒脂蛋白诱导的小鼠内皮祖细胞衰老的miRNA

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liulang_6699
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背景内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells, EPCs)是成熟血管内皮细胞的前体细胞,参与血管再生和内皮损伤后的修复过程。EPCs衰老及其功能紊乱可致血管内皮功能失调,后者与动脉粥样硬化的发生、发展密切相关。餐后阶段被认为是致动脉粥样硬化的关键时期。餐后高甘油三酯血症患者血浆中增多的残粒脂蛋白(Renmant-like particles, RLPs)与血管内皮功能失调密切相关,可加速人外周血单个核细胞来源EPCs的衰老进程,但其机制尚不明确。微小RNA (microRNA, miRNA)是一类在进化过程中高度保守的内源性非编码单链RNA,对真核生物的基因表达发挥重要的调控作用。最近发现miRNA参与调控细胞衰老。推测:miRNA可能参与调控RLPs诱导的EPCs衰老。目的观察RLPs对小鼠骨髓源性EPCs衰老的影响,筛选可能调控RLPs诱导的EPCs衰老的miRNA。方法通过密度梯度离心法从小鼠骨髓中分离单个核细胞,经差速贴壁结合特殊培养基扩增,诱导分化为EPCs。应用流式细胞技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、Flk-1和祖细胞标志CD133。以0.1mg/mL RLPs刺激EPCs为实验组,以等体积PBS刺激EPCs为对照组,分别孵育12h、24h、48h、72h,衰老相关β-半乳糖苷酶(Senescence-associatedβ-galactosidas, SA-β-gal)染色鉴定各组细胞衰老的情况。miRNA微阵列技术筛选衰老EPCs中表达显著变化的miRNA.结果经密度梯度离心和差速贴壁法分离所得的细胞经EBM-2专用培养基培养后,第4d可见集落形成,培养到第12d行流式细胞仪检测其CD34、CD 133、Flk-K1、CD31的阳性率分别为(65±4)%、(48±3)%、(37±3)%和(51±4)%。RLPs显著增加衰老EPCs细胞数。EPCs衰老数量在RLPs作用24h开始显著增多,48h的组间差异最明显。miRNA微阵列技术筛选出衰老EPCs中表达差异>2倍的miRNA有5个:表达显著上调的miRNA有1个,为miR-542-3p;表达显著下调的miRNA有4个,即miR-328, miR-324-5p, miR-27b, miR-191。结论经RLPs诱导的衰老小鼠EPCs中有5个表达差异>2倍的miRNA,它们可能参与调控RLPs诱导的EPCs衰老。
其他文献
目的:本研究利用高频超声、助力式弹性成像、声脉冲辐射力成像技术观测非特异性反应性淋巴结(CLPN)、转移性淋巴结(MLPN)、淋巴瘤性淋巴结(PLPN)三组淋巴结的超声表现,以探讨