【摘 要】
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我国柑橘栽培品种多为中熟品种,上市集中。培育不同熟期的新品种,才能满足大众的消费需求。本试验是以雷波脐橙(对照)及其早熟单株的果实为材料,从叶绿素降解代谢入手,通过比较其果皮叶绿素含量的差异、代谢产物差异、关键酶活性及关键基因表达差异,探讨了果实自然脱绿转色过程中叶绿素的变化特点,为柑橘类果实叶绿素降解代谢调控的相关分子机理提供理论依据。研究结果如下:(1)利用RAPD分子标记,对早熟单株和对照的
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我国柑橘栽培品种多为中熟品种,上市集中。培育不同熟期的新品种,才能满足大众的消费需求。本试验是以雷波脐橙(对照)及其早熟单株的果实为材料,从叶绿素降解代谢入手,通过比较其果皮叶绿素含量的差异、代谢产物差异、关键酶活性及关键基因表达差异,探讨了果实自然脱绿转色过程中叶绿素的变化特点,为柑橘类果实叶绿素降解代谢调控的相关分子机理提供理论依据。研究结果如下:(1)利用RAPD分子标记,对早熟单株和对照的DNA水平的差异进行了分析,确定了两者在DNA水平上存在可重复的差异。(2)早熟单株果皮的叶绿素含量在花后164至189天显著减少,而对照叶绿素含量在花后189至214天显著降低。在花后189天的果皮色差L值、b值差距最大,早熟单株高于对照;a值在花后139天差距较大,早熟单株高于对照。说明早熟单株果实的转色期明显比对照早25天。(3)通过在转色期早熟单株和对照果皮有色层叶绿素代谢产物的高效液相色谱(HPLC)检测发现,从早熟单株和对照果皮中检测到5种叶绿素代谢物,其含量从大到小为叶绿素a>叶绿素b>脱植基叶绿素a>脱镁叶绿酸甲酯a>脱镁叶绿素a。在脐橙生长发育过程中,叶绿素酶(CLH)和脱镁螯合酶(MDCase)是叶绿素降解中的关键酶,CLH和MDCase活性整体呈下降趋势。通过相关性分析,CLH和MDCase活性水平与叶绿素含量呈正相关。(4)经实时荧光定量表达(PCR)分析发现,PAO、CAB1、CAB2在果实各发育时期都有一定量的稳定表达,CLH、PPH、NYC1、SGR1先上调后下调表达,CAO先下调再上调再下调表达,CAB1、CAB2呈下调表达,且果实各时期早熟单株果皮中的CAB1、CAB2表达量均高于对照;而在早熟单株果皮中PAO、PPH、NYC1、CLH四个基因的表达量变化趋势较为接近,仅在果实转色前期表达量高于对照,而果实转色后期表达量均低于对照。不同关键基因调控不同的降解阶段,可知叶绿素降解代谢酶活性变化与其产物变化趋势一致,导致早熟单株叶绿素降解加快,在同一时期对照与早熟单株颜色对比强烈。
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