论文部分内容阅读
目的:制备红细胞负载VK1-壳聚糖纳米粒的长循环载体。该红细胞载体能够携带纳米粒免于被网状内皮系统所吞噬,进而达到携带VK1在体内进行长循环的目的,为需要长期应用VK1治疗的患者提供新的用药选择,增加该类患者的顺应性。方法:离子凝聚法制备包载VK1的壳聚糖纳米粒。通过单因素试验确定壳聚糖纳米粒制备过程中的影响因素,以粒径和包封率为评价指标,采用Box-Behnken效应面法对壳聚糖纳米粒的处方进行筛选。对壳聚糖纳米粒的粒径、Zeta电位、形态、包封率和载药量等性质进行评价;采用透析法考察壳聚糖纳米粒的体外释放情况;通过单因素试验考察红细胞负载纳米粒制备过程中的影响因素,通过正交试验确定最佳工艺条件。通过扫描电镜确定载药红细胞的形态变化,通过湍流脆性及渗透脆性考察纳米颗粒对红细胞膜流动性以及变形能力的影响。通过体外剪切力模拟考察纳米粒黏附力的强弱以。通过在大鼠体内的药代动力学试验考察载药红细胞的长循环效果。结果:制备壳聚糖纳米粒的最优处方为:壳聚糖0.5 mg/mL,pH=4.0,加入VK13 mg,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比为3:1。透射电镜观察壳聚糖纳米粒形态呈球形。壳聚糖纳米粒粒径为315.17 nm,Zeta电位为+25.3 mV,包封率为80.12%,载药量为3.62%。在体外250 h内累计释放率为80%。制备的红细胞载体的最佳处方为:壳聚糖纳米粒浓度为1 mg/mL,壳聚糖纳米粒与红细胞体积比为5:1,纳米粒与红细胞孵育时间20 min,孵育温度为37℃。载药量为323.8μg/mL,负载率为80.84%。扫描电镜下载药红细胞形态呈双凹型,与未载药红细胞相比,形态无明显变化。湍流脆性结果表明,与正常红细胞相比,载药红细胞湍流脆性降低,渗透脆性降低,体外剪切力试验表明,壳聚糖纳米粒黏附于红细胞表面,能够随着红细胞在体内循环。大鼠内药代动力学结果表明:载药红细胞组的平均Cmax为12.14 ng/L,明显低于注射液471.79 ng/L和纳米粒26.85 ng/mL。同时载药红细胞组维生素K1的半衰期为30.23 h,为注射液组的7.5倍,为纳米粒的2.14倍,且平均驻留时间延长明显。结论:采用离子凝聚法制备的壳聚糖纳米粒,通过与红细胞共同孵育,能够成功黏附于红细胞膜表面,避免被网状内皮系统吞噬,达到长循环的目的。