【目的与背景】阿托伐他汀(atorvastatin)是最有效的调脂药物之一,一系列大规模的临床试验肯定了其在冠心病整体防治中的重要作用,然而在临床应用中发现阿托伐他汀存在着不容忽视的个体差异(10%～70%)。目前认为,基因多态性所致的药物代谢酶和转运体活性的差异,可能是导致阿托伐他汀调脂疗效产生差异的主要原因。阿托伐他汀在体内的代谢与肝微粒体酶CYP3A有关,其中80%以上由CYP3A4/5所代谢,在肝脏发挥药理作用后阿托伐他汀及其代谢物经ABCC2基因编码的MRP2以及其它转运体转运出肝细胞。近年来的研究证实CYP3AP1-44G＞A不仅与CYP3A4和CYP3A5相关单核苷酸多态性位点处于连锁不平衡,而且该位点的变异能够降低CYP3A的活性。本课题组前期研究发现CYP3A4~*1G、CYP3A5~*3多态性能够影响阿托伐他汀或辛伐他汀降脂疗效。但尚未见CYP3AP1 -44G＞A多态性与阿托伐他汀降脂疗效相关性的报道。在中国汉族人群,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A是变异频率较高的两个位点,且国外文献报道其变异与MRP2的表达或功能相关。然而国内、外文献中均未见ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A多态性与阿托伐他汀调脂疗效的相关性报道。因此,本研究旨在探讨高脂血症病人中CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A多态性及其单体型对阿托伐他汀调脂疗效的影响,从而筛选出与阿托伐他汀治疗相关的遗传标志物,为实现以基因为导向的药物治疗和个体化给药提供实验依据。【材料与方法】1.研究对象202例河南汉族高脂血症患者[总胆固醇(TC)＞6 mmol/l或低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)＞3.36 mmol/l]均为郑州大学第一附属医院的住院或门诊病人。受试者在用药前接受体格检查和既往病史调查。本研究方案得到郑州大学医学伦理委员会认可,所有受试者了解试验过程并均签署知情同意书。2.基因型检测抽取高脂血症患者外周静脉血2～3 ml,用酚-氯仿法提取基因组DNA;采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,对CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A多态性位点进行检测分析。通过PCR扩增产物直接测序验证基因型检测方法的可靠性。3.阿托伐他汀降脂疗效的评价所有入选者每晚顿服阿托伐他汀片20 mg,连续用药4周。测定患者给药前及给药4周后血清TC、LDL-C、HDL-C和TG浓度。用给药4周后TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例作为评价阿托伐他汀调脂疗效的标准。根据基因分型结果将患者分组,观察CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A多态性与阿托伐他汀调脂疗效的关系。4.统计学分析根据基因分型结果将高脂血症患者分组,各组计量资料采用mean±SD表示。使用SPSS13.0软件以χ~2检验检测等位基因和基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡;用χ~2检验或Fisher’s精确概率检验法检测不同种族间基因多态性分布的差异;对数据进行单因素方差分析(ANOVA),并采用协方差分析,以年龄、体重指数和给药前血脂水平为协变量评价各基因组间阿托伐他汀调脂疗效的差异,各组间比较采用LSD法。以α=0.05作为检验标准。【结果】1.高脂血症病人中CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A等位基因的频率CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A等位基因在河南高脂血症人群中的频率分别为75.4%、20.5%和11.9%,等位基因和基因型分布符合Hardy-weinberg平衡(P＞0.05)。CYP3AP1 -44G＞A等位基因的频率与文献报道的印度人群(67.8%),非裔美国人(64.6%)和南亚人群相似(63.5%)(P=0.125,P=0.100,P=0.060),而显著低于高加索健康人群(92.1%)(P=0.000)。ABCC2-24C＞T等位基因的频率与文献报道的亚洲人群(17.3%)和高加索人群相似(23.3%)(P=0.331,P=0.475)。ABCC2 1249G＞A等位基因的频率与日本人群(9.3%)和高加索人群(16.8%)相似(P=0.272,P=0.106),而低于黑种人群(28.6%)(P=0.043)。2.CYP3AP1 -44G＞A多态性对阿托伐他汀调脂疗效的影响阿托伐他汀治疗4周后,GG、GA和AA基因型亚组之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著性差异(P＞0.05)。男性患者G等位基因携带(GG+GA)者TC的浓度在给药4周后明显低于AA型基因携带者(P=0.020),且两组之间TC改变比例有显著性差异(P=0.003),但两组间LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著性差异(P＞0.05)。女性患者治疗前和治疗4周后各血脂指标在G等位基因携带组和AA型携带者之间无显著性差异(P＞0.05),且两组间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例亦无显著性差异(P＞0.05)。3.ABCC2 -24C＞T多态性对阿托伐他汀调脂疗效的影响阿托伐他汀治疗前以及治疗4周后,CC、CT和TT基因型亚组之间的TG浓度均有显著性差异(P＜0.05),但各基因型亚组之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著差异(P＞0.05)。按性别分组时,男性T等位基因携带(TC+TT)组治疗前的TG浓度高于CC组(P=0.022),但治疗4周后无显著性差异(P=0.080),且两组之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著性差异(P＞0.05)。女性患者两组间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例亦均无显著性差异(P＞0.05)。4.ABCC2 1249G＞A多态性对阿托伐他汀调脂疗效的影响阿托伐他汀治疗前和治疗4周后GG、GA和AA三个亚组间TC、LDL-C、HDL-C和TG的浓度均无显著性差异(P＞0.05)。给药4周后各基因型亚组之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例亦无显著性差异(P＞0.05)。按性别分组时,男性患者A等位基因携带(GA+AA)组在治疗4周后的TG浓度显著高于GG组患者(P=0.023),但两组之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著性差异(P＞0.05)。女性患者两组间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例亦均无显著性差异(P＞0.05)。5.ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A构成的单体型对阿托伐他汀调脂疗效的影响ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A两个SNPs位点连锁不平衡关系较弱(D’:0.1164,r~2:0.293,χ~2=0.1533,P=0.695)。两个SNPs位点构成的各单体型之间TC、LDL-C、HDL-C和TG的改变比例均无显著性差异(P＞0.05)。【结论】1.CYP3AP1 -44G＞A,ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A等位基因在河南高脂血症人群中的频率分别为75.4%,20.5%和11.9%。2.CYP3AP1 -44G＞A多态性影响男性患者阿托伐他汀的降脂疗效,G等位基因携带组TC改变比例显著高于AA型携带者。CYP3AP1 -44G＞A多态性对女性患者阿托伐他汀的调脂疗效无显著影响。3.ABCC2 -24C＞T和ABCC2 1249G＞A多态性及其构成的单体型对阿托伐他汀的调脂疗效无显著影响。