重庆烟草青枯菌生理分化及致病型测定研究

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烟草青枯病是由茄科拉尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种细菌性维管束病害,对烟草的产量和质量影响极大,是威胁世界烟草生产的一大毁灭性病害,其防治十分困难。从长远的观点看,只有使用抗病品种才是控制此病的根本出路。因此,为了给烟草抗病品种选育工作提供理论依据,应当研究当地烟草青枯病菌种下分类情况,如生化型、生理小种及致病型的存在与分布情况。测定当地烟草青枯菌的生化型、生理小种及致病型是抗源筛选、抗病品种选育与推广中必须解决的前提和基础。本试验从重庆烟区烟草典型病株上分离获得若干分离株,对其进行人工培养及鞭毛染色,观察菌体形态,进行致病性测定,鉴定其是否是具有致病性的烟草青枯菌菌株,进而测定供试菌株对三种双糖、三种己醇的利用情况及对硝酸盐的还原情况,并接种生理小种鉴别寄主,进行烟叶浸润反应和黑色素产生试验,接种一套烟草致病型鉴别品种,初步获得重庆市烟草青枯菌生化型、生理小种及致病型的划分测定情况,试验研究结果如下:1、经过从烟草青枯病典型病株中的分离,通过平板划线法挑取典型单菌落,进行纯化,得到若干分离株,将其分别在NA培养基、PDA培养基和TTC培养基上进行人工培养,观察其菌落形态,经过细菌鞭毛染色,菌体形态观察,接种于云烟85测定致病性,最终筛选获得44个具有致病性的烟草青枯菌菌株。它们分别来自重庆市黔江区、酉阳县和武隆县等地。2、在同等条件下,注茎和叶腋针刺法的发病潜育期较伤根灌菌法短,注茎和叶腋针刺法在3、4天左右便可观察到青枯病症状,伤根灌菌需要10天左右;注茎和叶腋针刺法的接种植株死亡率100%,死亡时间也均比伤根灌菌法短,伤根灌菌法存在发病但未死的情况。3、44个菌株均能利用乳糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露醇、山梨醇、甜醇并产酸;均有脱氮作用,能使KNO3产生氮气;能使KNO3还原,产生亚硝酸根。根据青枯菌生化型的划分标准,44个菌株均为生化型Ⅲ,无其它型以及亚型。4、44个菌株接种到一套生理小种鉴别寄主上发病率均为100%,致病力总体较强,但各菌株对不同鉴别寄主的致病力存在一定的差异。供试菌株5-2-4、5-4-5、5-3-4、5-1-4、5-11-1、5-8-2、5-4-4、5-9-1、5-23-1、5-21-1接种6个鉴别寄主的平均病情指数均在90以上,它们分布在黔江区水田乡、新华乡,武隆县黄莺乡、仙女山镇。烟草、马铃薯、番茄、茄子对44个菌株反应很敏感,辣椒和花生的敏感性稍弱。44个菌株浸染云烟85的叶片24h后,所有浸染点均出现淡褐色斑点,60h以后,斑点颜色加深的程度各菌株之间略有差异;44个菌株在L-酪氨酸培养基上均不同程度的产生黑色素,且产生黑色素的能力各菌株间略有不同。可以确定44个供试菌株为生理小种1号。5、供试44个菌株依据它们在1套烟草致病型鉴别品种上的反应,可以划分为2个致病型。Ⅰ型菌株致病力中等,平均病情指数为75.00,占供试菌株的6.82%;Ⅱ型菌株致病力强,平均病情指数为89.48,占供试菌株的93.18%;供试菌株中没有弱致病力的菌株。Ⅰ型供试菌株6-2-1、6-1-1和6-1-2,分别来自黔江区大石坝乡和武隆县黄莺;其余为Ⅱ型供试菌株。
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