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大活络丸是我国使用已久的传统成方制剂,始于明代的《经验良方》,后经改良使用至今,具有较好的治疗效果而广泛应用于临床。目前大活络丸的生产企业共有109家,111个批准文号,现执行标准收载于中药成方制剂第六册和第十七册,同仁堂的同仁大活络丸执行标准为WS3-B-3184-98,其他生产企业的执行标准为WS3-B-1082-92。现行的大活络丸的质量标准已经执行许久,标准过于滞后,不能有效地控制其质量,保证临床应用的可靠性,因此有必要增加改进检测控制项目,建立更加完善的质量体系,确保大活络丸的有效性、安全性、可控性等。本论文对大活络丸建立了显微和薄层鉴别方法;采用HPLC法对方剂中麻黄的主要成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行含量测定,一测多评法首次应用于大活络丸中,测定了方剂中6个主要成分的含量;最后采用GC法对大活络丸中的挥发性的物质进行含量测定。1大活络丸的鉴别首先建立了显微鉴别方法,对大活络丸的茯苓、威灵仙、全蝎、僵蚕、麻黄、丁香、地黄、广藿香、豆蔻、何首乌、乌药、黄连、麝香、蕲蛇、天麻、葛根等16味药材进行显微观察鉴别,结果显示各味药材的显微特征明显,确定了16味药材的显微鉴别方法。其次采用薄层色谱鉴别(TLC)法对大活络丸中的当归、大黄、木香、甘草、黄连、牛黄、天麻、何首乌进行了鉴别,建立了当归、大黄、木香、甘草、黄连、牛黄、天麻、何首乌的薄层鉴别方法,结果显示,在相同的展开体系中供试品与相应的对照药材均有相同颜色斑点,斑点清晰,阴性无干扰,专属性较强。建立的显微和薄层鉴别方法简便可靠,可为大活络丸的质量控制做依据借鉴。2大活络丸中非挥发性物质的含量测定本部分实验采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定大活络丸中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量。色谱条件:色谱柱为Agilent ZORBX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:A(0.1%磷酸溶液)-B(乙腈)。梯度洗脱:0~30min,5%~7%(b);30~40min,7%~95%(b);40~50min,95%~95%(b);50~60min,5%~5%(b)。检测波长207nm;流速1.0ml?min-1;柱温25℃;进样10μl。盐酸麻黄碱在1.7024~51.072μg?ml-1线性关系良好(r=1.0000),加样回收率平均值为102.45%,rsd为1.55%(n=6);盐酸伪麻黄碱在1.8368~55.104μg?ml-1范围内线性关系良好(r=1.0000),加样回收率平均值为102.50%,rsd为1.52%(n=6)。采用此方法对34批大活络丸的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行了含量测定,实验验证表明此方法的重复性较好,结果准确,可行性高,为确保大活络丸的质量提供参考依据。采用一测多评法(qams)同时测定大活络丸中橙皮苷、葛根素、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、苯甲酸、黄芩苷6个成分的含量。以橙皮苷为内参物,计算葛根素、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、苯甲酸、黄芩苷相对于其的相对校正因子(rcf)分别为4.56、2.01、1.71、10.6、7.27。采用不同的高效液相色谱仪和不同的色谱柱对相对校正因子(rcf)的重现性考察,发现不同仪器和色谱柱上相对校正因子(rcf)的rsd值均小于5.0%,说明相对校正因子(rcf)的重现性良好。采用相对保留时间对待测各组分进行定位,葛根素、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、苯甲酸、黄芩苷相对保留值分别为2.20、0.89、0.94、0.85、0.78,rsd分别为4.4%、2.3%、2.2%、3.1%、3.4%。采用一测多评法对34批大活络丸的6个成分进行了含量测定,并将一测多评法和外标法测定的结果进行比较发现并无差异性。建立的6个成分的一测多评法可以用于控制大活络丸的质量,方法简便,廉价,省时、省力。3大活络丸中挥发性物质的含量测定本部分实验采用气相色谱(gc)法同时测定大活络丸中挥发性成分龙脑、异龙脑和丁香酚的含量。色谱条件:aglienthp-5毛细管柱(30m×0.32mm,0.25μm);柱温:程序升温,初始温度70℃,保持5min,以5℃?min-1升至150℃,以20℃?min-1升至280℃,保持5min。进样口温度200℃,检测器温度300℃,进样量为1μl,分流比为5:1,运行时间32min。龙脑在1.672~83.64μg?ml-1范围中线性关系良好(r=0.9997),加样回收率的平均值为99.83%,rsd为0.98%(n=6);异龙脑在1.6048~80.24μg?mL-1之间线性关系良好(r=0.9999),加样回收率平均值为99.22%,RSD为1.02%(n=6);丁香酚在1.5747~78.736μg?mL-1范围内线性良好(r=0.998),加样回收率平均值101.79%,RSD为1.14%。采用此种方法对34批样品进行了龙脑、异龙脑和丁香酚的含量测定。本方法准确可靠,简便可行,在大活络丸的挥发性物质的质量控制方面提供了依据参考,可较为全面地控制其质量,保证其临床使用的有效性。