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目的观察KM小鼠大脑中动脉缺血后脑梗死体积的改变以及海马神经细胞的变化;探讨KM小鼠大脑中动脉缺血后海马各区域星形胶质细胞数量和形态的改变;研究KM小鼠大脑中动脉缺血后海马各区域星形胶质细胞表达EAAT-2、ICAM-1和NF-κB P65的变化,探讨局灶性脑缺血后海马星形胶质细胞上谷氨酸转运体及炎症介质的表达。方法1采用新式线栓法制作KM小鼠右侧大脑中动脉缺血1h、3h、6h、12h、24h、48h模型,归为缺血组;同时制作假手术1h、3h、6h、12h、24h、48h对照和正常对照,分别归为假手术组和正常组。2取正常组及不同缺血时间组小鼠各3只,使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色,观察不同缺血时间后脑组织缺血部位及体积的改变。3其余小鼠处死后心脏灌注多聚甲醛,取脑切取海马所在区域,石蜡包埋后连续切片。4将正常组及缺血组小鼠脑组织切片应用苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色法染色后光镜下观察海马各区域神经细胞的形态变化。5将各组小鼠脑组织切片应用免疫组织化学法染色后光镜下观察海马各区域胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)阳性的星形胶质细胞数量及形态变化。6将各组切片应用免疫组织荧光标记法染色后在荧光显微镜下观察海马各区域星形胶质细胞表达兴奋性氨基酸转运体2(Excitatory amino acid transporter 2,EAAT-2)、细胞粘附因子1(Intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)和核转录因子P65(Nuclear factor-k-gene binding P65,NF-κB P65)的改变。7统计学方法:实验所得数据使用Excel 2016办公软件及SPSS 22.0软件整理并分析,数据采用均数±标准差((?)±s)表示,使用单因素方差分析比较数据,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1使用KM小鼠制作的右侧大脑中动脉缺血模型在饲养指定时长后出现不同程度的神经损伤症状,假手术组小鼠在饲养指定时长后未出现神经损伤症状。2 TTC染色结果显示右侧大脑中动脉缺血后,缺血48h内右侧脑组织梗死体积不断扩大(P>0.05),且在缺血后6h波及到海马;3 HE染色结果表明正常组小鼠海马区域神经细胞未出现异常;缺血组小鼠术后右侧海马神经细胞产生损伤,并随缺血时间的延长不断加重,缺血3h后大量神经元出现水肿,缺血6h出现不可逆性损伤,对侧海马神经细胞在缺血12h后也出现肿胀等改变;4免疫组织化学法结果显示假手术组与正常组小鼠海马GFAP阳性细胞数量无明显差异(P>0.05),细胞形态亦无明显改变;缺血组海马各区域GFAP阳性细胞数量在缺血48h内随时间的延长数量不断增多(P<0.05),胞体肿胀,突起也不断延长增粗,且细胞增长速度在6h时达到高峰。5 GFAP和EAAT-2免疫荧光标记结果显示,脑缺血后海马各区域EAAT-2阳性表达细胞增多,且EAAT-2主要位于GFAP阳性细胞上,GFAP和EAAT-2共存细胞在缺血24h内数量逐渐增多(P<0.05),缺血48h后GFAP和EAAT-2共存细胞数量又有所减少(P<0.05)。6 GFAP和ICAM-1免疫荧光标记结果显示,脑缺血后海马各区域ICAM-1阳性表达细胞增多,但仅有少部分ICAM-1位于GFAP阳性表达细胞上,ICAM-1和GFAP共存细胞在缺血12h后才开始明显增加(P<0.05)。7GFAP和NF-κB P65免疫荧光标记结果显示,脑缺血后海马各区域NF-κB P65阳性细胞表达增多,但仅有少部分NF-κB P65位于GFAP阳性表达细胞上,NF-κB P65和GFAP共存细胞随缺血时间的延长逐渐增多(P<0.05)。结论小鼠一侧大脑中动脉缺血后双侧海马神经元都会产生损伤,且缺血侧损伤更为严重;与此同时,海马区域星形胶质细胞会大量激活。小鼠大脑中动脉缺血后海马区域激活的星形胶质细胞表达EAAT-2增强,同时,其表达的ICAM-1和NF-κB P65也增强。