【摘 要】
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番鸭呼肠孤病毒（Muscovy Duck Reovirus,MDRV）自上世纪末开始在我国浙江、江苏、广东等地相继爆发,至今仍严重影响我国番鸭养殖业的经济发展。MDRV由于其易变异的特性,在感染力、传播力、致病力和致死率等方面出现较大的差异,极易衍化成新的致病毒株。若MDRV与传染性浆膜炎、大肠杆菌病或番鸭细小病毒病等并发或继发时,会导致病情加重,死亡率更高,对番鸭养殖造成巨大的经济损失。因此,及
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番鸭呼肠孤病毒（Muscovy Duck Reovirus,MDRV）自上世纪末开始在我国浙江、江苏、广东等地相继爆发,至今仍严重影响我国番鸭养殖业的经济发展。MDRV由于其易变异的特性,在感染力、传播力、致病力和致死率等方面出现较大的差异,极易衍化成新的致病毒株。若MDRV与传染性浆膜炎、大肠杆菌病或番鸭细小病毒病等并发或继发时,会导致病情加重,死亡率更高,对番鸭养殖造成巨大的经济损失。因此,及时有效地对MDRV进行防控具有重要的意义。研究表明MDRV和ARV不存在交叉反应,且目前市面上国外进口商品化试剂盒以ARV为主,国内全病毒包被试剂盒成本偏高,开发特异好、灵敏度高且价格低廉的MDRV抗体检测试剂盒迫在眉睫。当前该病毒的预防主要以弱毒活疫苗为主,但弱毒活疫苗本身具有变异、毒力返强等安全性问题,免疫活性强的亚单位疫苗成为理想的疫苗选择。本研究对2016-2019年广东、江苏等省份鸭场进行番鸭呼肠孤病毒流行病学调查,并通过建立荧光定量PCR检测方法进行实验室诊断。统计结果表明,MDRV核酸阳性率为36.5%（35/96）,其中混合感染的情况较多。本研究根据GenBank上的番鸭呼肠孤病毒基因组序列设计引物,对新分离到的7株番鸭呼肠孤病毒的σB和σC基因测序,并进行遗传进化分析,结果显示7个毒株均处于MDRV分支,新分离株与国内其他MDRV病毒存在一定遗传差异,说明国内MDRV出现了很大的变异性。MDRV-ZQ毒株的全基因组测序表明,MDRV-ZQ毒株的λA、μA、μNS基因核苷酸序列与815-12毒株相似性最高（nt:96.9%-98.1%）,在λC、μB、σA、σB基因核苷酸序列与ZJ2000M毒株相似性最高（nt:95.4%-98.1%）,λB基因核苷酸序列与MW9710毒株相似性最高（nt:97.9%）,σC基因核苷酸序列与YB毒株株在相似性最高（nt:96.7%）,而σNS基因核苷酸序列与S14毒株的相似性高达99.7%。系统发育分析表明,MDRV-ZQ的σA、σB、σC都处于独立的分支,表明MDRV-ZQ株是个新的变异毒株。本研究通过原核表达系统成功表达大小约为91 kDa的重组MDRV-σC蛋白,经Western Blot鉴定,该蛋白能与鼠源His-tag单抗和MDRV多抗血清产生特异性反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。使用重组蛋白作为包被抗原,建立了MDRV间接ELISA抗体检测方法。该方法特异性强,与番鸭细小病毒等的阳性血清无交叉反应,且重复性良好,临床样品检测符合率高。为了对原核表达的重组MDRV-ZQ-σC蛋白进行免疫原性探究,本研究进行了攻毒保护实验。从解剖观察、排毒检测、组织病毒载量检测和病理组织学观察等方面,均发现重组蛋白对试验鸭不能达到完全保护效果。与目前市面上流行的商品活苗MDRV-CA株对当前流行毒株MDRV-ZQ株的保护效果进行对比,保护效果一致。综上所述,本研究为MDRV分子流行病学提供了参考素材,且建立了敏感、快速的抗原和抗体检测方法,并探究了当前主要流行毒株MDRV-ZQ株σC蛋白免疫原性,对该病的预防和治疗具有重要意义。
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