亚微米电极/微电解池电化学检测单个中性粒细胞中的过氧化物酶

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本论文用微型电解池对单细胞分析进行了一些研究。共分三章:第一章.复合微/微及微/纳米电极的制作,表征及简单应用。第二章.人中性粒细胞提取液中过氧化物酶的测定。第三章.微电解池检测人单个中性粒细胞中的过氧化物酶。 第一部分以Au圆盘电极作为工作电极,Ag/AgCl作为参比电极和辅助电极制作了复合微电极。其中Au圆盘电极的直径只有微米级甚至纳米级,Ag/AgCl电极的直径也大约只有100μm,将二者放入一θ管(尖端的直径<200μm)内。整个复合微电极的直径<200μm,可以较易地放入微型电解池内检测微量物质。此复合微电极在制作过程中最大的困难是将工作电极和参比电极要完好地插入θ管内,而且二者平行互相不接触,尤其工作电极为纳米电极时,电极很容易损坏。其次是θ管尖端封胶时要均匀,不能碰坏电极,并且有效地防止溶液进入θ管内部。作好的复合微电极在1.00×10-2mol/LK3Fe(CN)6和0.500mol/LKCl进行表征,然后用于BQ的测定,获得了满意的结果。 第二部分我们通过复合微电极检测了细胞提取液中的过氧化物酶(PO)含量,计算出平均单个细胞内PO的含量。方法原理是酶催化底物H2Q和H2O2产生BQ,然后BQ在Au工作电极上被还原,记录0V--0.4V的伏安曲线,测得BQ产生的电流。从而通过PO催化反应所产生的BQ的量来测定细胞提取液中PO的含量。 第三部分用HF酸刻蚀载玻片,制作微电解池,体积大约为10nL-40nL。放入微型电解池内的电极为Au微米工作电极(直径约为20μm)和Ag/AgCl参比电极(直径约为100μm)制作的复合微电极。我们通过推片法将单个人中性粒细胞置于微型电解池内,再用冻融法将细胞溶膜,然后用自制的微量注射器将一定体积的H2Q和H2O2缓冲溶液注入微型电解池内,孵育一段时间,用线性扫描伏安法进行检测。
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