何首乌为蓼科植物何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥块根,具有多种药效活性,在临床和民间都有广泛应用。近年来由何首乌导致的肝损伤病例时有发生,引起国家和专家学者高度重视,但是由何首乌导致肝毒性的化学成分和作用机理仍然不十分清楚。本课题利用斑马鱼模型,对何首乌不同萃取部位斑马鱼肝毒性和化学成分进行研究和分析,为探索何首乌肝毒性物质基础提供一定科学依据。首先,以斑马鱼作为毒理模型,研究了何首乌氯仿部位、乙酸乙酯部位、剩余水相部位固体提取物对斑马鱼幼鱼肝脏毒性。(1)采用24 h急性毒性实验,测算何首乌不同萃取部位对斑马鱼幼鱼10%的致死剂量,据此确定各个部位的低、中、高给药剂量。(2)给药24 h后剩余水相高浓度组和空白组斑马鱼幼鱼肝脏透明,轮廓明显,形态完整,而氯仿高浓度组和乙酸乙酯高浓度组斑马鱼幼鱼肝脏变为暗灰色,透明度降低,肝脏变大;与空白组对比,氯仿高浓度组和乙酸乙酯高浓度组的肝体比具有显著性差异;经过HE染色,与空白组相比,氯仿高浓度组、乙酸乙酯高浓度组肝细胞数量减少,并出现出泡变性及排列不规则现象,对比空白对照组,氯仿部位和乙酸乙酯部位吖啶橙染色的荧光强度具有差异,这表明氯仿部位和乙酸乙酯部位的幼鱼肝脏区域出现较多的凋亡细胞。以上各指标均显示出氯仿部位和乙酸乙酯部位可导致斑马鱼幼鱼出现肝损伤。(3)在生化指标检测上,氯仿部位和乙酸乙酯部位低、中、高浓度组ALT水平均显著高于空白对照组(P<0.01);氯仿部位和乙酸乙酯部位高浓度组AST水平显著高于空白对照组(P<0.05)结果显示,氯仿部位和乙酸乙酯部位对于肝细胞具有较严重损伤,结合高效液相成分含量分析,推测何首乌造成肝损伤的化学成分主要为蒽醌类化合物。(4)乙酸乙酯部位低、中、高浓度组T-SOD水平显著低于空白对照组(P<0.01),结合给药组中各化学成分含量以及与氯仿组对照分析,推测引起T-SOD降低的化学成分极可能为二苯乙烯或者鞣质类成分(儿茶素、表儿茶素、没食子酸)。以上结果表明氯仿部位和乙酸乙酯部位对斑马鱼幼鱼具有肝脏毒性,其作用机制可能是何首乌中的毒性成分通过破坏斑马鱼幼鱼肝细胞的氧化应激平衡,进而导致肝细胞损伤。其次,建立了何首乌HPLC分析方法,测定了氯仿部位、乙酸乙酯部位及剩余水相部位中大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚、二苯乙烯、没食子酸、儿茶素、表儿茶素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷等11个化合物含量。结果显示三个部位的化学成分组成存在明显的差异,并根据斑马鱼毒理模型生化指标,进一步推测出何首乌肝毒性成分可能为蒽醌类化合物,实验结论为何首乌肝毒性提供了一定科学依据。