目的本研究主要通过体内外实验探讨肿瘤细胞来源微粒(tumour-derived microparticles,TMPs)对于血液凝固状态的影响,并对其机制进行了初步研究,为肿瘤相关性血栓性疾病机制的研究及防治提供新思路和新靶点。方法1.H22-肝癌细胞小鼠腹腔传代:将H22-肝癌细胞以每只200μL接种于Balb/c小鼠腹腔,待腹水长成后,无菌抽取,PBS洗涤重悬继续接种,待3代后肿瘤细胞活性恢复即可使用。2.肿瘤细胞来源微粒的提取、鉴定:抽取腹水型H22-肝癌细胞,洗涤,无血清条件下诱导48 h,高速差速离心法提取TMPs,使用透射电镜、流式细胞术及纳米粒度仪对所提取TMPs进行鉴定。3.肝细胞肝癌移植瘤模型建立:将H22肝癌细胞以200μL/只接种于Balb/c小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤。接种后监测小鼠体重及瘤大小,待实验结束后取小鼠柠檬酸钠抗凝血分别检测其凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶原时间(APTT)及血浆中肿瘤源细胞来源微粒(TMPs)数并分析相关性。4.不同结构的肿瘤细胞来源微粒:10%胰酶处理TMPs,去除其表面蛋白,只保留膜磷质结构;10%SDS处理TMPs,去除其磷脂结构,只剩下蛋白成分。5.凝血指标检测:本实验使用凝血酶原时间(PT)及活化部分凝血活酶时间(APTT)作为反映血液凝固状态的指标,四通道凝血仪检测其值大小。结果1.随着荷瘤小鼠瘤径的增加,其血浆中TMPs数逐渐增加,而PT、APTT逐渐缩短(P<0.05),且TMPs数与PT、APTT呈现负相关关系。2.体外提取的MPs中TMPs所占比例为70%。3.在体外实验中,随着TMPs的增加,PT、APTT逐渐缩短(P<0.05)。4.去除TMPs表面蛋白后,透射电镜结果显示TMPs囊泡结构存在,纳米粒度仪结果显示粒径无明显变化,流式细胞术结果显示TMPs表面TF水平显著下降,同时其促凝活性较完整结构TMPs组减弱(P<0.05),与PBS对照组相比仍具有促凝活性(P<0.05)。5.去除TMPs磷脂结构后,透射电镜结果显示TMPs囊泡结构不存在,只剩下呈片状聚集的物质,纳米粒度仪结果显示粒径分布发生了明显的变化,流式细胞术结果显示TMPs表面PS水平显著降低,同时其促凝活性较完整结构TMPs组减弱(P<0.05),与PBS对照组相比仍具有促凝活性(P<0.05)。6.同时去除TMPs表面蛋白及磷脂结构,其促凝活性较完整结构TMPs组显著减弱(P<0.05),与PBS对照组相比无促凝活性(P>0.05)。结论1.本实验中体外提取物质经透射电镜、流式细胞术及纳米粒度仪鉴定后可确定为MPs,同时以Annexin-Ⅴ~+CD326~+MPs定义为TMPs,流式细胞术结果表明TMPs占MPs的70%。2.体内外实验结果显示随着TMPs数量的增加,PT、APTT值逐渐缩短,提示TMPs具有促凝活性,可能介导恶性肿瘤患者血液高凝。3.TMPs发挥促凝活性依赖于表面蛋白及磷脂两部分结构。