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AT-Ⅲ是血浆中抑制凝血酶的关键物质，是目前公认的DIC早期诊断指标，同时AT-Ⅲ对DIC具有预防和治疗作用。制备高特异性、高亲和性的抗AT-Ⅲ单克隆抗体是建立AT-Ⅲ含量ELISA测定法和进行AT-Ⅲ纯化的前提条件，为此我们研制抗AT-Ⅲ的单克隆抗体，以期为上述工作奠定基础。 从人体血浆中提取较高纯度的抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）的，通过低温乙醇处理血浆，得到的沉淀经肝素-琼脂糖两次亲和层析，并透析、浓缩获得AT-Ⅲ的初品。用此方法提纯的AT-Ⅲ经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，显示所提取的AT-Ⅲ为单一成分。从血浆开始计算的AT-Ⅲ回收率为8.0％，比活性为7.7IU/mg。 本研究采用常规法进行小鼠免疫和细胞融合。SP2/0细胞和免疫脾细胞按1：10比例融合，融合剂PEG分子量为1500，阳性克隆筛选采用三步进行。首先检测小鼠Ig，阳性孔用我们提取的AT-Ⅲ进行筛选，最后用AT-Ⅲ标准品进行特异性抗体测定。本次实验共免疫小鼠4只，融合率为92.2％，阳性率为5.8％。获得三株分泌抗人抗凝血酶Ⅲ的杂交瘤细胞株D5、E2、F6，免疫球蛋白的类型为IgG1型。 双抗体夹心ELISA是常用的免疫分析技术，主要适用于检测大分子的蛋白质抗原。我们所建立的双抗夹心ELISA测定血清中AT-Ⅲ含量的实验方法，采用多克隆抗体作为包被抗体，以捕获更多的AT-Ⅲ分子，提高实验方法的灵敏度。用单克隆抗体作为酶结合物抗体可以提高实验方法的特异性。对D5、E2、F6三种单克隆抗体进行比较，发现其中一种单克隆抗体适合采用夹心方法的检测。通过对该检测方法稳定性、准确度、重复性等指标的观察，初步认为该实验方法可以用于临床标本的检测。并用本课题建立的双抗夹心ELISA法测定了32例急性心肌梗塞病人和10例正常人血清中AT-Ⅲ的含量。