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[目的]检测中波紫外线对Jurkat细胞和系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞自噬水平和miRNA表达的影响;筛选miR-125b-5p的下游靶基因并鉴定;调控miR-125b-5p及其下游靶基因的表达后检测中波紫外线照射对细胞自噬水平的影响,以探索中波紫外线通过自噬通路在系统性红斑狼疮疾病过程中的作用,以及差异性表达的miRNA在此过程中的作用和调控机制。[方法]1.使用0-200mj/cm2的中波紫外线对Jurkat细胞进行照射,于照射后12h、24h、48h通过Western-blotting、qPCR、激光共聚焦显微镜检测自噬信号通路标志激活基因(微管相关蛋白1轻链3、Beclin-1)和miR-125b-5p的表达水平。2.使用50mj/cm2的中波紫外线照射系统性红斑狼疮患者和正常人的外周血单个核细胞,24h后通过Western-blotting、qPCR检测自噬信号通路标志激活基因(微管相关蛋白1轻链3、Beclin-1)的表达水平;通过高通量测序(RNA-seq)和miRNA芯片技术对差异性表达的mRNA和miRNA进行筛选,并使用Western-blotting、qPCR进行鉴定。3.使用生物信息学的方法寻找miR-125b-5p与自噬通路相关的下游靶基因,通过Western-blotting、qPCR检测其在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达情况。转染miR-125b-5p的激动剂/胎抗剂后通过Western-blotting、qPCR检测对靶基因表达的影响,共转染miR-125b-5p的模拟物和荧光素酶报告基因载体后通过检测荧光素酶的比值以确认miR-125b-5p对靶基因3’UTR的作用靶点。4.使用miR-125b-5p的激动剂/拮抗剂、紫外线照射抵抗相关基因的过表达载体/小干扰RNA转染Jurkat细胞并照射中波紫外线后,通过Western-blotting、qPCR、激光共聚焦显微镜检测自噬通路基因(微管相关蛋白1轻链3、Beclin-1、自噬相关基因7、紫外线照射抵抗相关基因)的表达变化。[结果]1.当中波紫外线照射剂量小于50mj/cm2时,随剂量的增加,自噬水平逐渐升高;当中波紫外线照射剂量大于50mj/cm2时,随剂量的增加,自噬水平逐渐降低;50mj/cm2剂量组的自噬水平最高。2.当照射剂量小于50mj/cm2时miR-125b-5p的水平与照射剂量呈负相关,而当照射剂量大于50mj/cm2时miR-125b-5p的水平与照射剂量呈正相关,当照射剂量为50mj/cm2时miR-125b-5p的表达水平最低。3.在未暴露于中波紫外线时,系统性红斑狼疮患者和正常对照的外周血单个核细胞内自噬标志基因(Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 II、自噬相关基因7、紫外线照射抵抗相关基因)的水平无明显差别;在暴露于中波紫外线后,系统性红斑狼疮患者的外周血单个核细胞内自噬标志基因(Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 II、自噬相关基因7、紫外线照射抵抗相关基因)的水平显著上升,而正常对照则无明显变化。4.在未暴露于中波紫外线的情况下,系统性红斑狼疮患者的外周血单个核细胞中miR-125b-5p的表达水平较正常对照组低;暴露于中波紫外线后系统性红斑狼疮患者和正常对照的外周血单个核细胞中miR-125b-5p的表达均较未暴露时降低,系统性红斑狼疮-中波紫外线组的miR-125b-5p表达水平最低。5.过表达miR-125b-5p可以降低紫外线照射抵抗相关基因的表达,抑制miR-125b-5p可以提高紫外线照射抵抗相关基因的表达;miR-125b-5p通过与紫外线照射抵抗相关基因的3’UTR互补序列结合,下调紫外线照射抵抗相关基因的mRNA和蛋白表达。6.下调miR-125b-5p的表达或上调紫外线照射抵抗相关基因的表达可以提高Jurkat细胞的自噬水平;上调miR-125b-5p的表达或下调紫外线照射抵抗相关基因的表达可以降低Jurkat细胞的自噬水平。[结论]中波紫外线可以诱发Jurkat细胞自噬和改变miR-125b-5p的表达水平,其效应与照射剂量有关。中波紫外线通过下调系统性红斑狼疮患者的外周血单个核细胞内miR-125b-5p的表达水平,上调紫外线照射抵抗相关基因的表达,从而促进细胞自噬。