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大豆glycinin与β-conglycinin分别占大豆蛋白的40%和30%,是最主要的大豆抗营养因子之一,它的存在影响了大豆制品在饲料中的使用。本研究以低温豆粕为原料,经分离纯化大豆glycinin与β-conglycinin,制备抗glycinin与抗β-conglycinin多克隆抗体,建立了定量检测大豆glycinin与β-conglycinin的单向免疫扩散检测法(Single Radial Immunodiffusion,SRI)。分离纯化蛋白先采用Tris-HCl缓冲液碱提酸沉,硫酸铵分级沉淀进行初步分离,再利用ConA-Sepharose 4B亲和层析进一步纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳,Quantity One软件分析可得:大豆glycinin纯度＞90%,大豆β-conglycinin纯度＞80%。利用纯化的大豆glycinin与β-conglycinin作为免疫蛋白原,采用脚掌、胭淋巴结、背部皮下及耳静脉综合免疫法分别免疫大耳白兔。双向免疫扩散测抗血清效价高于1:32时,采血制备血清,硫酸铵盐析纯化,向纯化的抗体中添加1%甘氨酸和1%海藻糖,冷冻干燥保存。经双向免疫扩散检测,两种抗体间无交叉反应,同时,抗体也不与花生粕、棉粕、菜粕、玉米蛋白粉和鱼粉等饲用蛋白原料反应,表现出较好的特异性。采用单因素实验优化提取样品抗原蛋白的方法。以纯化的大豆glycinin与β-conglycinin为标准蛋白,建立定量检测大豆glycinin与β-conglycinin的单向免疫扩散检测法。该法工作曲线在50μg/mL～200μ/mL浓度范围内呈良好线性关系,检测限为1mg/g。精密度与准确度研究显示,该法批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%,样品回收率在98%～113.6%之间,表现出较好的可重复性和准确性。因此利用本检测法定量检测大豆制品中glycinin与β-conglycinin是可行的。