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研究目的近年来实验表明,多种恶性实体瘤的侵袭、播散及不良预后都与趋化因子受体CCR7 (C-C chemokine receptor 7, CCR7)、CXCR4 (CXC chemokine receptor 4，CXCR4)等的表达存在关系,而对于这些因子在T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-cell non-Hodgekin’s lymphoma, T-NHL)中的表达,国内外则少有报道。本实验拟检测CCR7、CXCR4、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9, MMP-9)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)等因子在T-NHL肿瘤组织中的表达,并分析这些因子的表达与临床病理学参数之间的关系；同时对两种T-NHL细胞系在不同培养条件下CCR7、CXCR4、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)／蛋白激酶B (protein kinase B, PKB/Akt)信号转导通路的表达及细胞体外侵袭能力进行比较,初步探讨趋化因子受体在T-NHL播散过程中的作用及分子机制,旨在为T细胞淋巴瘤靶点治疗的新方向提供一定的实验基础及理论依据。研究方法第一部分：收集天津医科大学总医院病理科2003年1月～2008年12月间T-NHL石蜡包埋标本41例、同一时期反应性增生淋巴结石蜡包埋标本19例及相应的临床病理资料,应用免疫组织化学染色技术,检测T-NHL中CCR7、CXCR4、MMP-2、MMP-9及VEGF等的表达,并探讨这些因子的表达与患者临床病理指标之间的关系。第二部分：选取皮肤T细胞淋巴瘤细胞系Hut78及成人T细胞淋巴瘤／白血病细胞系Jurkat进行常规细胞培养及添加不同浓度的CCR7配体CCL21(又名SLC,secondary lymphoid tissue chemokine)的(分组)共培养,应用RT-PCR、Western Blotting技术分别检测不同培养条件下两种T-NHL细胞系中CCR7、CXCR4及PI3K/Akt信号转导通路在基因水平、蛋白水平的表达,同时进行Transwell小室侵袭实验观察细胞系体外侵袭能力,分析趋化因子受体及其配体的相互作用对于细胞体外侵袭能力的影响及其涉及的下游分子机制。结果与结论1. T-NHL肿瘤组织中CCR7、CXCR4、MMP-2、MMP-9及VEGF的高表达(++～+++)率均高于反应性增生淋巴结组织,差异均具有统计学意义(P<0.01)；证实T-NHL肿瘤组织中存在CCR7、CXCR4、MMP-2、MMP-9及VEGF的高表达。2.CCR7的高表达率在T-NHL多部位发生组(92.6%)高于单部位发生组(64.3%),差异具有统计学意义(P<0.05); MMP-9的高表达率在T-NHL多部位发生组(96.3%)高于单部位发生组(71.4%),临床分期Ⅲ～Ⅳ期组(100%)高于Ⅰ～Ⅱ期组(79.2%),肿瘤大小>3cm组(96%)高于肿瘤大小≤3cm组(75%),差异均具有统计学意义(P<0.05)；与MMP-9不同的是,MMP-2在T-NHL多部位发生组的高表达率(52.9%)低于单部位发生组(83.3%),差异具有统计学意义(P<0.05)；由此可以推测,CCR7、MMP-9的高水平表达可能提示T-NHL预后较差,而MMP-2的高表达却可能是T-NHL预后较好的提示。3. T-NHL肿瘤组织中CXCR4的表达与CCR7及MMP-9的表达分别存在着正相关关系；提示这些指标的联合检测可能对于临床评估预后具有重要的价值。4.常规培养条件下,Hut78细胞中CCR7mRNA、CCR7蛋白、CXCR4mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA、Akt蛋白、p-Akt蛋白的表达均明显高于Jurkat细胞,在Transwell侵袭实验中,Hut78细胞的穿膜细胞数也明显高于Jurkat细胞。结果提示,CCR7表达水平高的T-NHL细胞体外侵袭能力强,T-NHL细胞中CCR7的表达可能影响其体外侵袭能力,而且其下游机制可能涉及PI3K/Akt信号通路的激活。5.两种T-NHL细胞在添加有不同浓度CCL21的培养条件下：两种细胞在Transwell侵袭实验中细胞穿膜数量相比于其各自的常规培养组均明显增加,Hut78细胞各浓度组穿膜细胞数均高于Jurkat细胞相应浓度组穿膜细胞数；提示CCR7的配体CCL21可在一定程度上增强T-NHL细胞的体外侵袭能力。6.CCL21共培养后的两种细胞中CCR7mRNA、CCR7蛋白、CXCR4mRNA、PI3KmRNA、AktmRNA、Akt蛋白、p-Akt蛋白等均发生表达上调；细胞侵袭实验穿膜细胞数量的增加及各指标表达的上调,均与CCL21浓度的增高呈现正相关趋势；进一步证实,通过CCL21与CCR7的相互作用,继而激活下游PI3K/Akt信号通路,可在一定程度上增强T-NHL细胞的体外侵袭能力,而且这一调控是精细的,在一定的CCL21浓度范围内存在着浓度正相关趋势。