重组抗体与细胞因子的融合蛋白结合了抗体独特的靶向功能和细胞因子的多功能活性，被称为免疫细胞因子(Immunocytokines，ICK)，临床前研究结果显示其良好的应用前景。本研究采用基因工程方法构建了抗人ErbB-2 scFv-Fc-IL-2融合蛋白(HFI)，并对其抗原结合特性、IL-2生物学活性及体内外杀伤ErbB-2过表达肿瘤细胞的功能进行了初步研究。本研究分三个部分。1抗人ErbB-2 scFv-Fc-IL-2融合基因的构建及表达采用基因工程技术将鼠抗人ErbB-2单链抗体(scFv)基因、人IgGl Fc段基因以及人IL-2基因融合，插入质粒pCI/dhfr，构建成重组质粒pCI/HFI。以此载体转化CHO细胞，分别用夹心ELISA法、细胞ELISA法、流式细胞术及MTT等方法检测转染的CHO细胞培养上清中融合蛋白的活性。构建的融合蛋白被命名为HFI，HFI能被抗人IgG及抗人IL-2抗体所识别，能与高表达ErbB-2的SKBR3细胞特异性结合，并能促进IL-2依赖细胞系CTLL-2细胞增殖，即HFI保留了识别ErbB-2抗原的能力及IL-2的生物学活性。经质谱分析证明HFI的实际蛋白序列与理论设计一致。2利用两阶段培养方法提高HFI在CHO细胞中的表达采用基因工程技术删除载体内SV40启动子中72 bp的增强子序列，以弱化二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase dhfr)。用改构后的表达载体转染CHO细胞，加压筛选，获得了稳定表达HFI的工程细胞株。HFI的表达水平由最初的100 ng/ml提高到25μg/ml。通过优化工程细胞培养温度和两阶段培养策略，HFI表达水平得到进一步提高(60-80μg/ml)。同时，较为系统地研究了降低培养温度对工程细胞增殖、细胞活力、凋亡、细胞周期及对HFI表达水平和生物学活性的影响。结果显示，降低培养温度可增强细胞活力，减少细胞凋亡，而不影响HFI的生物学活性。本部分研究通过优化表达载体和工程细胞培养方案，有效地提高了HFI的表达水平，为HFI进入中试生产和临床前实验奠定了良好的基础。3 HFI体内外抗肿瘤活性的初步研究在本部分研究中，通过体内外实验证明HFI能在体外有效地介导ADCC作用，在ErbB-2高表达的肿瘤动物模型中显示了良好的抗肿瘤活性。其抑瘤活性显著优于游离IL-2及scFv。本部分研究证明，HFI对于未来ErbB-2高表达肿瘤的治疗和病人术后残留灶、转移灶的清除，可能具有重要的应用价值。