樟芝口服液制备及其解酒效果研究

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樟芝,又名牛樟菇、牛樟芝,是台湾地区特有的一类十分稀少的药食两用真菌。已发现其有多种活性成分,如三萜类化合物、多糖、腺苷、安卓奎诺尔等,具有护肝、抗疲劳、抗癌、抗炎、抑菌等功效,最早被台湾当地居民用于治疗因过量喝酒或疲劳引起的不适。由于它只寄生在牛樟木上,生长速度缓慢,因此价格较昂贵。本论文将以液态培养方式,以提高樟芝胞外三萜类化合物含量为目标,通过正交试验优化其液体培养基;在此基础上,以樟芝液为原料,配制成樟芝口服液;最后通过动物体内实验,初步研究其解酒护肝的效果。根据本研究需要,改进了三萜类化合物测定方法:香草醛-高氯酸法。该方法的操作过程为:待测样液0.1 mL加入0.2 mL的5%香草醛-冰醋酸和0.5 mL的高氯酸于60℃水浴20 min,然后放置室温再加入5 mL的冰醋酸于540 nm波长处测定。该方法的显色反应在30 min内稳定,精密度高、加标回收率高。研究了樟芝液态培养过程中菌丝体生长与胞外三萜类化合物代谢的变化规律,发现菌丝体生物量随时间延长而增加,前3天为对数生长期;胞外三萜类化合物含量则先增加后下降。随后通过单因素试验,探讨樟芝液体培养基成分,发现葡萄糖和果糖为最佳碳源、胰蛋白胨为最佳氮源、钾离子为最佳常量元素。随后以胞外三萜类化合物含量为指标,通过正交试验对其培养基成分进行优化,得出最优配方为:葡萄糖10g/L、果糖10 g/L、胰蛋白胨30 g/L、磷酸氢二钾0.1 g/L。以该配方培养得到的樟芝生物量达12.07±0.63 g/L,是未优化前的2.18倍,三萜类化合物含量达0.510±0.017 mg/mL,是未优化前的1.68倍。研究了樟芝口服液的制作工艺,以樟芝液、谷胱甘肽、牛磺酸、水苏糖为原料,以感官评定为评价指标,通过正交试验得出最优的配方:樟芝液80%(v/v)、谷胱甘肽2 g/L、牛磺酸2 g/L、水苏糖2 g/L、柠檬酸0.3%。通过光照试验、温度试验和加速试验,发现樟芝口服液在避光条件下具有良好的稳定性。研究了樟芝口服液的毒性作用,连续灌胃小鼠,未发现异常甚至死亡现象,推断樟芝口服液安全无毒。通过动物体内实验,初步研究了樟芝口服液的解酒护肝效果,发现樟芝口服液能显著延长小鼠醉酒耐受时间,缩短醉酒时间;在生化指标方面,樟芝口服液能抑制因酒精损害而导致的谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平升高,且能促进肝组织中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶水平的升高。说明樟芝口服液具有一定的解酒护肝功效。
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