~(111)In标记的单克隆抗体3H11在结肠癌肿瘤模型中的评价

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本论文首次将单抗3H11用于结肠癌研究,探讨该抗体用于结肠癌显像诊断的可行性,用111In标记后进行体内、体外评价。首先,通过免疫组织化学(酶联免疫显色、免疫荧光)方法检测体外培养的人结肠癌细胞和荷瘤裸鼠肿瘤组织的3H11抗原表达情况。实验结果表明在细胞水平上,体外培养的HT29人结肠癌细胞高表达3H11抗原,表达水平与阳性对照细胞BGC823相当;并且荷瘤裸鼠结肠癌组织中也检测到3H11抗原表达。用125I标记的3H11进行放射性配基结合分析,结果表明单抗3H11与HT29细胞具有良好的亲和力。然后,将双功能连接剂CHX-A″-DTPA与单抗3H11进行偶联,通过ELISA分析比较偶联物CHX-A″-DTPA-3H11与单抗3H11的活性,结果显示偶联修饰未损伤抗体的生物活性。该偶联物成功地用111In标记,制备111In-CHX-A″-DTPA-3H11的标记率为84.26%,经PD-10柱纯化后放化纯大于99%。标记物在生理盐水、PBS和裸鼠血清中均具有良好的稳定性。参考Lindom方法测定111In-CHX-A″-DTPA-3H11的放射免疫活性分数,显示标记物较好地保持了生物活性。最后,进行异种移植人结肠癌裸鼠的γ显像和生物分布研究。荷瘤裸鼠注射标记物1d后就能获得清晰的肿瘤显像。生物分布研究中,肿瘤对放射性有较好的摄取,肿瘤摄取到5d时达到最高值16.71±0.78%ID/g,5d时T/NT比值分别为:肿瘤比血4.96,肿瘤比肌肉为30.02,肿瘤比骨为10.29,肿瘤比肾为2.55,肿瘤比肝为1.04,肿瘤比胃为19.42,肿瘤比肠为8.52。本研究证明HT29人结肠癌细胞系在体内、体外均高表达3H11抗原,3H11抗原很有希望成为结肠癌诊断和治疗中一个新的靶点。本实验成功制备了111In-CHX-A″-DTPA-3H11,标记物显示出良好的体内外稳定性,在模型鼠中成功地定位于结肠癌组织,并且在肿瘤中获得较高的摄取。这是一种很有前景的肿瘤放射免疫显像剂。本研究为进一步开展结肠癌的放射免疫治疗研究奠定了基础。
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