关节软骨损伤、缺损所导致的剥脱性骨软骨炎、骨性关节炎这些疾病，一直缺乏有效的治疗手段。主要原因是因为人体关节软骨细胞生长缓慢，难以完成自身修复。 近年来，随着组织工程(Tissue Engineemg)技术的介入，对该病的治疗有了新的突破。自体软骨细胞移植(Autologous Chondrocyte Implantation，ACI)成为目前治疗关节软骨缺损疾病的最佳途径。 ACI通过体外培养、扩增患者自体软骨细胞，然后移植到病损处，修复软骨缺损。传统单层培养(monolaver)方法可以进行软骨细胞体外培养和扩增，但这种方法细胞扩增速度有限，且软骨细胞容易失去其分化表型。因此在体外培养时如何快速获得大量有良好分化表型的软骨细胞，是ACI修复关节软骨的关键问题。 复习文献后发现，旋壁生物反应器(Rotating W_all VesselBioreactor，RWVB)对多种细胞及组织的体外培养，包括软骨细胞，都有优于传统单层培养的效果。于是，进行了使用RWVB作关节软骨细胞体外培养的尝试。 本研究使用生物反应器(Bioreactor)进行兔关节软骨细胞的体外培养，利用细胞培养、免疫组织化学等技术，观察细胞存活率、生长曲线、细胞代谢和组织形态学的改变，并与单层培养作以比较，探讨更加合理的细胞体外培养方式。 目的 选用旋壁生物反应器对兔关节软骨细胞进行体外培养，并与传统单层培养方法作以比较。为改进软骨细胞体外培养方法提供依据。 方法 1 无菌条件下切取3周龄兔关节表面软骨组织，酶消化法分离提取，获得原代(第O代)关节软骨细胞。 2 方瓶培养并传代。收集第l代软骨细胞分为两组，A组使用24孔板单层培养；B组使用旋壁生物反应器三维培养。 3 用倒置相差显微镜、细胞染色等方法对两组细胞生长过程进行观察、监测、鉴定，比较两种培养方法对细胞活力、增殖速度、Ⅱ型胶原产量的影响。在培养开始后每天分别对两组细胞取样，MTT法绘制生长曲线，计算细胞倍增时间，作数据分析。 结果 1 形态学观察显示：两组兔关节软骨细胞体外培养后24h开始贴壁。A组细胞外形为圆形或三角形，随着培养时间延长，细胞体积变大，向梭形发展。B组软骨细胞外形始终保持圆形或椭圆形，细胞呈团簇聚集生长。 2 生长曲线表明，两组细胞均在培养48h左右进入指数生长期，A组细胞相对B组细胞增长缓慢。B组细胞的平均倍增时间显著短于A组细胞，检测数据分析有统计学差异。 3 甲苯胺蓝染色及免疫组化染色提示B组细胞有更丰富的GAG和Ⅱ型胶原产生。 结论：生物反应器扩增与单层培养方法相比，软骨细胞体外培养扩增速度更快，胶原和GAG产量都更高，并且持久保留软骨固有细胞表型，是软骨细胞体外规模化扩增的更佳选择。