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禽流感（Avian Influenza，AI）是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染病，有重要的公共卫生意义。本研究的目的是以高致病性禽流感病毒A／Chicken／Shanghai／1／2000（H5N1）作为免疫原研制单克隆抗体（McAbs），并将研制的McAbs初步应用于AIV检测。尿囊液用甲醛灭活，差速离心法提纯，三次免疫BALB／c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0-Ag-14融合。用间接ELISA和血凝抑制（HI）试验筛选阳性细胞株。将获得的阳性细胞株用有限稀释法进行多次亚克隆，筛选稳定分泌McAbs细胞株。 本研究一共获得14株能够稳定分泌特异性McAbs的杂交瘤细胞株，分别命名为2B6、3A5、4B3、5A5、5C2、F2、A6、1A2、1A4、1D3、4A6、5A2、6B5和6C4，其中2B6和3A5的免疫球蛋白亚类为IgM，4B3、F2、A6、1D3、4A6和6C4的免疫球蛋白亚类为IgG2a，其余6株McAbs均为IgG1。McAb A6具有HI特性，并可以与重组鸡痘病毒表达的H5亚型AIV HA蛋白反应，能与64株H5亚型AIV中的2株病毒发生HI反应。用间接ELISA试验测定McAbs与125株AIV分离株的反应性，结果显示有11株McAbs即2B6、3A5、5C2、A6、1A2、1A4、1D3、4A6、5A2、6B5和6C4能与H5亚型AIV反应，反应的比例均低于56％（36／64）；3株McAbs（5A5、4B3与F2）能与H5亚型和H9亚型AIV发生反应，其中5A5与H5亚型AIV反应的比例为48％（31／64）、与H9亚型AIV反应的比例为49％（30／61）；4B3与H5亚型AIV反应的比例为89％（57／64）、与H9亚型AIV反应的比例为83％（51／61）；F2与H5亚型AIV反应的比例为89％（57／64）、与H9亚型AIV反应的比例为90％（55／61）。用McAbs（4B3和F2）进行交叉反应实验，确定了McAbs可用于双抗体夹心ELISA的最佳包被和酶标方式，以McAb 4B3为基础建立的双抗体夹心ELISA对64株H5亚型AIV、61株H9亚型AIV、36株H3亚型AIV、6株H1亚型AIV、2株H4亚型AIV、2株H6亚型AIV和2株H11亚型AIV进行检测，阳性检出率分别为98％（63／64）、90％（55／61）、97％（35／36）、扬州大学硕士学位论文100%（2/2）、100%（2/2）、100%（2/2）和100%（2/2）;与30株新城疫病毒和l株传染性支气管炎病毒、1株传染性法氏囊病毒和1株产蛋下降综合征病毒进行交叉反应，结果均呈阴性。以McAb 4B3为基础建立的双抗体夹心EUSA对AIV的最小检测限为0.4卜g/ml。