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目的本课题组前期研究发现CsA(Cyclosporine A，CsA)与牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide，Pg-LPS)联合作用在促进牙龈成纤维细胞（gingival fibroblasts，GFs）的增殖、分泌转化生长因子β1（TGF-β1）上具有协同作用；在动物试验中也发现炎症可以促进CsA的牙龈增生作用。这种协同促进作用是否仅存在于牙龈，能否在体外促进牙周韧带成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts，PDLFs）增殖，体内促进牙周组织再生未见报道。因此本实验拟观察CsA联合Pg-LPS对PDLFs增殖情况和生物学活性的影响。通过大鼠牙周局部注射CsA、LPS，研究CsA联合LPS对大鼠牙周组织的影响；在此基础上建立SD大鼠下颌骨缺损的动物模型，观察CsA联合LPS对动物模型牙周组织缺损修复情况的作用。方法1.体外观察不同浓度的CsA(10ng/mL，100ng/mL，200ng/mL，400ng/mL)和LPS(10ng/mL，100ng/mL，1000ng/mL)对人PDLFs增殖的影响。2.选取CsA100ng/mL+LPS100ng/mL，CsA100ng/mL+LPS1000ng/mL观察二者联合应用对人PDLFs增殖的影响。3.体外通过实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, Realtime PCR）、考马斯亮蓝染色、ELISA、Von Kossa染色等方法比较含CsA100ng/mL，LPS100ng/mL，CsA100ng/mL+LPS100ng/mL的不同培养液对人PDLFsⅠ、Ⅲ型胶原基因表达、总蛋白量、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、骨形成蛋白-2（Bone morphogenetic protein-2，BMP-2）、矿化结节的形成等各种生物学功能的影响。4.在SD大鼠下颌骨第一磨牙颊侧局部注射CsA2mg/kg及不同浓度的LPS(10，1，0.1μg)，30d后HE染色观察大鼠牙龈、牙槽骨的变化。5.人工构建SD大鼠牙周缺损模型，缺损对应口腔内局部注射CsA2mg/kg、CsA2mg/kg+LPS1μg，30d后取材，HE染色观察低剂量CsA单独应用及联合低剂量LPS应用对大鼠牙周缺损再生的影响。结果1.不同浓度的CsA组中只有CsA100ng/mL具有促人PDLFs增殖的作用，高浓度LPS（1000ng/mL）会抑制PDLFs的增殖，中、低浓度LPS（100,10ng/mL）对细胞的增殖没有影响。2. CsA100ng/mL+LPS100ng/mL联合作用对人PDLFs的增殖没有影响，CsA100ng/mL+LPS1000ng/mL联合作用会抑制细胞的增殖。3. CsA100ng/mL+LPS100ng/mL，CsA100ng/mL组的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase, ALP)、骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)表达量高于阴性对照组，矿化结节形成的时间也短于阴性对照组；CsA100ng/mL促进人PDLFs总蛋白量的合成，CsA100ng/mL+LPS100ng/mL对细胞总蛋白量的合成没有影响；Resltime PCR检测结果显示CsA100ng/mL、CsA100ng/mL+LPS100ng/mL组人PDLFsⅠ型胶原的表达量高于阴性对照组，但是会降低Ⅲ型胶原的表达。4. CsA2mg/kg局部注射不会引起牙龈增生，也不会引起牙槽脊高度的降低；LPS局部注射对牙龈没有影响，但是LPS10μg会引起下颌骨牙槽脊高度的降低；5. CsA2mg/kg单独及联合低剂量LPS，对大鼠缺损的修复没有影响，既无促进作用，也不会抑制。结论一定剂量的CsA具有促进PDLFs增殖、合成及分化能力，与低浓度的LPS联合应用对促进PDLFs的体外矿化具有一定的协同作用；低剂量CsA单独及与低剂量LPS联合应用于大鼠，对大鼠的牙周组织没有损坏作用，但是对牙周修复再生也没有促进作用