【摘 要】
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利用枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶（TrpRS)的高表达质粒pKSW表达和纯化了枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶.通过体外转录的方法制备了一系列tRNA的突变体.并用枯草杆菌和人这两种不同种属
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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利用枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶（TrpRS)的高表达质粒pKSW表达和纯化了枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶.通过体外转录的方法制备了一系列tRNA的突变体.并用枯草杆菌和人这两种不同种属来源的TrpRS测定了这些tRNA分子的氨酰化活力（K<,cat>/K<,M>）.通过不同种属的TrpRS交叉氨酰化活力测试,我们证实枯算杆菌和人tRNA的个性元件均对TrpRS的种属特异性氨酰化有作用,对来源于三个不同种属（真核,原核和古核）的TrpRS和tRNA氨基酸接受茎的序列联配分析揭示了TrpRS和tRNA氨基酸接受茎的共进化关系.设计了一个含有20个核苷酸长度随机序列的随机库,并以枯草杆菌TrpRS作为亲和介质对随机库进行体外筛选.进行了枯草杆菌TrpRS与小螺旋DNA的紫外光定点交联实验.
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