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目的:
本课题拟用C57BL/6小鼠为实验观察对象,在一次性大剂量胸部照射后的多个时间点上,观察受照射后小鼠一般状况及外周血红、白细胞变化,用光镜观察实验小鼠肺组织的放射损伤的病理改变,并以免疫组化法测定肺组织TNF-a的表达,评价扶正减毒颗粒对实验小鼠放射性肺损伤的防护作用,从炎症细胞因子方面初步探讨扶正减毒颗粒防护放射性肺损伤的作用机制,为进一步研发防治放射性肺损伤中药新药提供实验依据。
方法:
本实验选取C57BL/6小鼠共54只,1-54编号,随机分为3组:(1)空白对照组18只:经胃灌注生理盐水0.5ml/(只.d);(2)单纯照射组18只:全肺单次照射12gy+经胃灌注生理盐水0.5ml/(只.d);(3)照射+扶正减毒颗粒18只:全肺单次照射12gy+扶正减毒颗粒0.5ml/(只.d)。扶正减毒颗粒与生理盐水按1:5配成悬浊液,制备成0.2g/ml。药物剂量的计算按人与动物计量换算。生理盐水及扶正减毒颗粒均为陕西中医学院附属医院制剂室提供。于照射前1周开始灌胃,直至照射后一月结束,于照射后1天,14天,28天断颈活杀实验组及相同鼠龄对照组小鼠,空白对照组,单纯照射组和照射+中药组各6只。各组每一时间点观察小鼠精神状态、饮食、活动量、体重、分泌物及大便等一般状况,外周血红白细胞情况,小鼠肺脏做常规病理组织学与免疫组化分析。
结果:
1、动物活体观察发现,单纯照射组小鼠与各中药治疗组相比,精神萎靡、进食量、活动量减少等表现出现较早,持续时间较长,鼻周红赤、眼睛黄色分泌物、大便干硬等发生率较高。空白组,中药加照射组小鼠精神状态、进食量、活动量无显著差别,但鼻周红赤、大便干硬等发生率低于单纯照射组。2、大体标本观察发现,单纯照射组小鼠于照射第14天时见肺脏肿胀、表面鲜红,并有暗红色斑片状出血;第28天时肺肿胀明显,肺脏体积增大,表面瘀斑颜色转暗;中药加照射组第14天时肺脏表面见少量点状出血,肺脏肿胀;第28天时肺脏表面少量暗红色淤点,肺脏体积肿胀不明显,可见瘀斑,苍白实变灶较小。3、肺组织病理镜下观察表明,单纯照射组第14天时肺组织病变表现为肺间质充血、出血、水肿明显,肺泡结构破坏,肺泡腔可见少量红细胞;第28天时急性炎症明显,肺泡间质增厚,肺泡腔变小,血管内皮大量淋巴细胞浸润肺泡腔可见大量红细胞。中药加照射组照射后第1天肺间质无变化、肺泡结构基本正常,血管内皮可见淋巴细胞浸润;第14天时肺间质增厚不明显,肺组织病变表现为肺间质充血、出血、水肿明显,肺泡结构破坏,肺泡腔可见少量红细胞;第28天时肺泡结构破坏程度较单纯组明显减轻,肺间质充血、出血、水肿明显纤减轻。通过免疫组织化学染色,应用多功能真彩色形态学分析软件JD-801D软件测定TNF-a阳性细胞数的表达。小鼠在照射后第1,14,28天在支气管单纯照射组与空白组有显著性差异(P<0.01),而应用扶正颗粒加照射组表达明显低于单纯组(P<0.05)。
结论:
1、C57BL/6小鼠受照射后出现精神萎靡、进食量、活动量减少、鼻周红赤、眼睛黄色分泌物、大便干硬,体重下降。肺脏表面肿胀、充血及出血点,放射治疗后小鼠外周红、白细胞下降等表现与中医“热毒内盛”及“热伤肺络”证相符,表明动物实验共36只造模成功。
2、应用扶正减毒颗粒能减轻C57BL/6小鼠活体肺组织表面肿胀、出血、间质充血、水肿及肺泡结构破坏程度。
3、扶正减毒颗粒对C57BL/6小鼠放射性肺损伤具有减轻放疗副作用,主要体现在改善小鼠的一般情况和减轻外周血中红、白细胞的下降。
4、扶正减毒颗粒可明显抑制C57BL/6小鼠肺组织中TNF-α的表达,可能为其减轻C57BL/6小鼠急性放射性肺损伤的药效的机制之一。