林麝转录组开发微卫星位点及圈养林麝的亲缘关系分析

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林麝(Moschus berezovskii)隶属偶蹄目(Artiodactyla)、反刍亚目(Ruminantia)、麝属(Moschus,)、麝种(Moschus berezovskii.),是麝属中体型最小的动物,因成年雄性林麝分泌麝香而闻名。由于麝香有巨大的经济价值,导致林麝被大规模偷盗捕杀,林麝种群数量锐减,2002年,林麝被列为国家一级重点保护动物;在2008年的世界自然保护联盟(IUCN)濒危物种红色名录中,林麝被评为濒危物种。目前,人工养殖林麝是保护林麝种质资源和麝香获取的主要手段。但是由于单一追求林麝数量,盲目繁殖,导致林麝种群遗传多样减少,林麝个体体质下降。为充实林麝在遗传学方面的研究数据,对林麝养殖提供指导,丰富林麝的多态性位点,本文进行了以下研究:提取死亡林麝的骨髓细胞进行培养,并从中获取林麝的c DNA文库,进行转录组测序,获取林麝的微卫星位点;从中选取100个林麝微卫星位点进行验证,通过筛选最终获得林麝9个多态性微卫星位点,最后,我们利用这9个微卫星位点对凤县逢春林麝养殖场的15只林麝样本进行了遗传多样性分析和聚类分析。所得主要结果如下:1.从死亡林麝的股骨头中成功分离出骨髓细胞,并且培养至P6代。2.利用骨髓细胞提取出林麝的RNA,经反转后获得林麝的c DNA文库;并根据转录组测序分析的结果,选择了100对林麝微卫星位点的引物,使用琼脂糖凝胶电泳对其进行特异性检测后,100对引物中有49对引物有特异性。3.将49对引物进行多态性验证,最终获得9个多态性微卫星位点。4.利用这9个微卫星位点对15只引进的雄性林麝进行多态性和亲缘关系检测,发现15只林麝的种群可以聚类为8类,且之间的亲缘关系较远,其中编号为11539和08562的林麝在林麝种群中与其他林麝分支最远。本研究结果证明转录组测序能够简便快捷的获取林麝的微卫星位点;本研究筛选所得的微卫星标记也可用于揭示林麝的亲缘关系,有利于在林麝的养殖和繁育中筛选优质个体,增加群体基因多样性,也为后续林麝亲缘鉴定提供参考。
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