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胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤，约占颅内肿瘤的35~60%，具有发病率高、复发率高、病死率高和治愈率低的特点。胶质瘤分化差、浸润性强，导致手术切除困难，尽管手术辅以放化疗对提高生存率有一定的作用，但由于胶质瘤的发病机制尚未完全阐明，因此治疗效果有限。因此需要对胶质瘤发病机制进一步深入研究和寻找针对胶质瘤新的治疗策略。随着miRNAs的发现及其在细胞内的作用机制不断深入研究，miRNAs在胶质瘤中的调控作用越来越受到重视，它能够调节肿瘤细胞的生长，在体内发挥着类似于癌基因和抑癌基因的作用。其中miR-128为脑组织富含，在胶质瘤中表达降低，在胶质瘤发病机制中起到了类似于抑癌基因的作用。我们希望通过慢病毒介导的方法，提高miR-128在胶质瘤细胞中的表达，研究其高表达后对人胶质瘤U87细胞的影响，为胶质瘤的基因治疗寻找新的治疗途径。目的：在大样本脑胶质瘤组织中检测miR-128情况，构建含miR-128-1和miR-128-2前体的慢病毒表达载体，包装慢病毒，建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究miR-128对胶质瘤细胞功能影响。方法：实验分为三部分：1.选取了在西京医院手术切除的新鲜胶质瘤组织和正常减压切除脑组织，胶质瘤组织经常规和免疫病理检查确定胶质瘤级别。提取总RNA，利用实时定量PCR检测miRNA在各级别胶质瘤中的表达情况，以明确大样本中miR-128的表达是否为低表达。2.扩增hsa-miR-128的前体片段，与pENTR3C同时经过BamH I和Xho I双酶切，使用T4DNA连接酶连接入pENTR3C质粒中，测序正确后，利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒，再次测序验证。构建好的质粒与PMD2.G、psPAX2两个辅助质粒使用脂质体2000导入293T细胞，包装出慢病毒。同时进行慢病毒滴度测定。3.将包装好的慢病毒感染人胶质瘤U87细胞，使用Bsd筛选高表达miR-128的人胶质瘤U87细胞株，与未感染U87细胞进行对比，进行MTT和流式细胞检测，明确细胞增殖方面的改变。结果：经大样本临床标本检测，miR-128在胶质瘤中表达比正常脑组织降低，高级别胶质瘤中的表达低于低级别胶质瘤。成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2，经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证，成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.1×107-8.3×107TU/mL之间，细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制。结论：miR-128在人脑胶质瘤中表达与胶质瘤恶性程度呈负相关。成功包装出含有两种miR-128前体的慢病毒，筛选出稳定高表达miR-128的U87细胞株。miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖。