论文部分内容阅读
钙磷是蛋鸡健康发育的必要矿质元素,在蛋鸡骨骼发育和蛋壳形成中有不可或缺的作用。本课题以蛋鸡体内主要的钙磷转运体CaBP-D28k、PMCA1b、NPt2a和NPt2b为研究靶点,对其时空表达规律、影响因素以及与蛋壳品质的关联进行研究,为更清晰认识蛋鸡钙磷转运奠定基础。研究一蛋鸡钙磷相关转运体的时空表达规律试验采集海兰褐蛋鸡1、4、6、12、18、20、28、80周龄样品。结果表明,血钙浓度随生长明显上升（P<0.0001）,血液ALP水平随生长不断降低（P<0.0001）。十二指肠、空肠和回肠CaBP-D28k蛋白产蛋前18周几乎不表达,开产后迅速升高,产蛋期表达量最高（P<0.0001）,80周龄表达下降。各肠段PMCA1b蛋白表达以育雏期和产蛋期最高,育成期表达最低（P<0.0001）。肾脏CaBP-D28k和PMCA1b蛋白表达整体变化不大,育雏期和产蛋期表达水平要高于育成期（P<0.05）。小肠各肠段育雏期和产蛋期NPt2b蛋白表达显著高于育成期（P<0.05）。肾脏NPt2a mRNA表达随生长不断上升,产蛋期表达量最高（P<0.0001）,并在产蛋末期有所降低。研究二日粮有效磷对钙磷相关转运体表达的影响选择30只23周龄的海兰褐蛋鸡,随机将其分为3个处理,低磷处理饲喂0.15%AP的日粮,对照处理饲喂0.41%AP的日粮,高磷处理饲喂0.82%AP的日粮。结果显示,日粮磷含量不影响蛋品质（P>0.05）。与对照组相比,高磷显著上调血磷和血液ALP水平（P<0.05）,低磷日粮处理明显降低血磷（P<0.05）,日粮磷含量对血钙浓度无影响（P>0.05）。对照组十二指肠CaBP-D28k和PMCA1b蛋白表达显明显于空肠和回肠（P<0.05）,空肠CaBP-D28k蛋白表达亦明显比回肠高（P<0.05）,十二指肠NPt2b mRNA表达明显比其它肠段高（P<0.05）,十二指肠NPt2b蛋白表达明显比空肠高（P<0.05）。与对照比,低磷和高磷日粮显著上调十二指肠PMCA1b mRNA表达（P<0.05）,低磷日粮显著上调回肠CaBP-D28k和NPt2b mRNA表达,低磷日粮显著下调蛋壳腺CaBP-D28k mRNA和十二指肠NPt2b蛋白表达（P<0.05）。研究三植酸酶对小肠钙磷相关转运体表达的影响试验选用15周龄育成期伊莎褐蛋公鸡50只随机分为5个处理,对照组饲喂0.4%有效磷正常日粮,试验组饲喂补充植酸酶的0.2%有效磷日粮,试验第10天将Cr2O3作为外源指示剂按0.5%的比例添加至各组饲料。结果表明,与对照组比,植酸酶A、C、D组血磷水平显著低于对照组（P<0.05）,血液Ca、ALP无差异。对照组中,食糜钙磷消失率从十二指肠到回肠明显升高（P<0.05）,而植酸酶处理组空肠和回肠钙磷消失率无差异（P>0.05）,植酸磷消失率各肠段无差异（P>0.05）。对照组各肠段CaBP-D28k蛋白表达无差异（P>0.05）,十二指肠PMCA1b蛋白表达水平明显比其它肠段高（P<0.05）,十二指肠NPt2b蛋白表达显著比回肠高（P<0.05）。添加植酸酶能够显著抑制十二指肠CaBP-D28k蛋白表达（P<0.05）,并促进回肠PMCA1b蛋白的表达（P<0.05）,对小肠NPt2b蛋白表达影响不大。研究四环境温度对钙磷相关转运体表达的影响选用13周龄伊莎褐蛋鸡360只,分为22、24、26、28、30oC五个温度处理,每天处理8小时（10:00-18:00）,之后环境温度恢复到22oC,正常饲喂至18周龄后进行样品采集。结果显示,温度处理对血液Ca、P、ALP无显著影响（P>0.05）。24oC26oC小肠各肠段CaBP-D28k和PMCA1b mRNA和蛋白表达水平显著高于其它温度（P<0.05）,此外30oC还能促进小肠CaBP-D28k mRNA、PMCA1b mRNA和蛋白表达（P<0.05）。24oC和30oC能促进肾脏CaBP-D28k mRNA表达（P<0.05）,22oC和30oC能促进肾脏PMCA1b蛋白表达。26oC30oC最适合小肠NPt2b mRNA表达（P<0.05）,22oC28oC最适合小肠NPt2b蛋白表达（P<0.05）。24oC26oC肾脏NPt2a mRNA表达高于其它温度（P<0.05）。研究五蛋壳品质与钙磷转运体表达之间的关联性试验挑选出低蛋壳品质蛋鸡和正常蛋壳品质蛋鸡各20只,对其进行采样分析。结果表明,低蛋壳品质组蛋重、蛋壳厚度、蛋壳硬度显著低于正常蛋壳品质组（P<0.05）。两组血液Ca、P、ALP无显著差异（P>0.05）。低蛋壳品质组只有回肠PMCA1b蛋白显著低于正常蛋壳品质蛋鸡组（P<0.05）,其它小肠、肾脏和蛋壳腺钙磷转运体表达无差异。综上所述,蛋鸡小肠和肾脏钙磷转运体主要在育雏期和产蛋期表达,十二指肠钙磷转运体表达比空肠和回肠高,但各肠段钙磷吸收能力相似。植酸酶主要在十二指肠分解植酸磷,并能抑制十二指肠CaBP-D28k表达;日粮磷水平主要影响钙磷转运体mRNA水平的表达;最有利于小肠CaBP-D28k、PMCA1b和肾脏NPt2a表达的温度是24oC26oC,22oC28oC最有助于小肠NPt2b蛋白表达,22oC和30oC最有利于肾脏钙转运体表达;蛋壳品质下降可能与回肠PMCA1b表达下降有关,具体机制有待进一步探究。