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目的： 运用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术，研究原发性肝细胞癌患者与正常健康个体血清蛋白质组表达图谱的差异，寻找和确定原发性肝细胞癌特征性血清标志物。为肝癌的临床早期诊断与治疗提供可靠的、准确灵敏的实验室参考指标。 方法： 原发性肝细胞癌患者与正常人血清标本获得后，双向凝胶电泳的第一向电泳采用固相pH梯度电泳，第二向采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析血清蛋白质组成分。电泳后经银染或考马斯亮蓝染色，ImageMaster双向凝胶电泳软件分析，将有意义的差异蛋白质点胶内胰蛋白酶解，经过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)鉴定。本项研究还对血清白蛋白和IgG的去除、蛋白上样量、等电聚焦参数、平衡条件、两向之间的转移、SDS-聚丙烯酰胺凝胶的浓度等血清蛋白质组双向凝胶电泳的关键步骤进行了改进和优化。 结果： 1．对血清双向凝胶电泳的关键步骤改进和优化后获得了较好的肝细胞癌患者及正常人血清蛋白质组双向电泳图谱。 2．原发性肝细胞癌患者血清与正常健康个体血清相比较，经双向凝胶电泳软件分析，共找到33个差异表达的蛋白质，其中6个蛋白质在原发性肝细胞癌患者血清中含量降低，5个蛋白质含量增加，另有17个蛋白质在原发性肝细胞癌患者血清中缺失，5个蛋白质点为原发性肝细胞癌患者血清所特有。天津医科大学硕士学位论文肝细胞癌患者血清中缺失，5个蛋白质点为原发性肝细胞癌患者血清所特有。.选取在原发性肝细胞癌中缺失的3个蛋白质点(Spotl、2、3)，在原发性肝细胞癌中含量减低的2个蛋白质点(Spot 16、17)和在原发性肝细胞癌中含量增加的2个蛋白质点(Spot18、32)共7个蛋白质点进行MALDI一TOF质谱鉴定，成功得到了7张肤质量指纹图谱，经数据库检索鉴定分析，确定在原发性肝细胞癌患者血清中缺失的Spotl、2、3分别为血清白蛋白、血清转铁蛋白、CDS抗原类蛋白;在原发性肝细胞癌患者血清中含量减低的蛋白质点SPot16、17也是血清白蛋白;在原发性肝细胞癌患者血清中含量增加的蛋白质点Spot 18、Spot32分别为锌一。2糖蛋白和免疫球蛋白Y- 1链C区。结论:1.根据蛋白质不同的分子量和等电点，通过双向凝胶电泳技术可将人血清中 蛋白质成分进行分离，并可利用分析软件，找到不同疾病状态下血清中的 差异蛋白质。2.原发性肝细胞癌与正常人相比，在血清蛋白质组成分中存在差异。.找到的这些差异蛋白质为进一步完善原发性肝细胞癌血清学诊断指标提供了参考依据。