研究背景:两性畸形是泌尿生殖系统少见病,近年来随着临床诊断技术的不断进步,人们就诊意识的增强,两性畸形患者的就诊及确诊率不断提高,两性畸形逐渐被人们所重视。尽管如此,两性畸形因其病因复杂,分类混乱,给临床诊治带来了较大的困难。尤以男性假两性畸形的临床诊治是泌尿外科医生较为棘手的问题。男性假两性畸形根据病因大体可分为:1、促性腺激素性性机能减退;2、睾酮合成障碍;3、雄激素受体不敏感综合症;4、5-a还原酶缺乏;5、苗勒氏管永存综合症;6、性腺发育不良;7、46XY女性化综合症等,如果再细分则种类更多。由于对该疾病的认识有限,临床上明确诊断有一定困难,诊断的不明确也导致了治疗的盲目性。目前认为,早期明确诊断,早期综合治疗对于部分类型的男性假两性畸形患者会有更好的治疗效果。它不仅能减轻患者的经济负担及手术创伤带来的痛苦,更重要的是能最大程度的避免患者的心理畸形。男性生殖系统及第二性征的发育比较复杂。人类原始未分化性腺是具有双潜能的性腺,SRY基因是男性Y染色体短臂上的性别决定基因,其表达诱导原始未分化性腺向睾丸发育,是男性性别发育的始动因素。研究显示性别的决定并非由SRY基因单一因素所决定,其对于睾丸的绝对意义受到了质疑,通过对SRY基因的检测,探讨其在临床诊断中的作用。睾丸的发育除受到众多上游因素影响外,还受到睾丸自身分泌的各种因子的多重作用。睾丸的两种主要细胞Leydig细胞、Sertoli细胞分别分泌睾酮(T testosterone)和苗勒氏管抑制因子(MIS)。睾酮基本能反应睾丸的功能状态,但它不能完全诱导个体的男性化进程,不能保证男性生殖道及第二性征的完全发育。最近苗勒氏管抑制因子(MIS)的生理作用越来越受到重视,它的主要作用是抑制副中肾管发育为输卵管,子宫和阴道上部,若MIS功能异常也将导致两性畸形的产生。我们拟通过通过检测SRY基因对睾丸的敏感性, MIS、T在男性假两性畸形血清中的表达,探讨它们在男性假两性畸形诊断中的作用及相关性,为临床男性假两性畸形的明确诊断提供更多的依据。雄激素不敏感综合症(AIS)是男性假两性畸形中较为常见的一种类型,受体的缺陷程度不同使临床表现差异很大,分为完全性雄激素不敏感综合症(CAIS)和不完全性雄激素不敏感综合症(IAIS)。AIS属于X连锁隐性遗传病,是位于X染色体上决定雄激素受体的基因发生突变,引起雄激素靶细胞膜上的雄激素受体缺陷,造成对雄激素不敏感。对AIS病因的研究已取得一定的进展,发现了一些可能的致病突变,但其确切的发病机制仍不十分清楚,我们拟对1个患完全性雄激素不敏感综合症的小家系进行雄激素受体基因的检测,明确其可能存在的致病突变基因,在分子水平上对其诊断提供有价值的资料。目的:明确SRY基因、MIS、T三项指标在男性假两性畸形诊断中的作用及其相关性,为临床明确诊断提供依据。对1个完全性雄激素不敏感综合症的小家系进行雄激素受体基因的检测,明确其可能存在的致病突变基因。方法:收集男性假两性畸形及无生殖系统病变患者清晨空腹静脉血,分置两管。管1:促凝:离心后取上清(血清)置于EP管中,-20度保存待测MIS及T。管2:EDTA抗凝:提取基因组DNA。1.测试受试者染色体核型,提取受试者DNA,应用PCR技术对所有标本SRY基因进行检测。2.对两组标本采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测T及MIS值,对所得结果进行统计学分析,探讨SRY基因、T及MIS在男性假两性畸形诊断中的意义及相关性。3.对患完全性雄激素不敏感综合症的两同胞兄弟提取DNA,采用基因测序技术分析雄激素受体基因,并进行比对分析。结果:1.患病组MIS水平较对照组显著增高,差异性显著(P<0.05),有统计学意义。2.患病组T水平虽较对照组高,但无显著性差异(P>0.05),无统计学意义。3.患病组中SRY ( + )6例, SRY ( - ) 1例;对照组中7例SRY皆( + )。所有受试者皆有睾丸。SRY基因对于诊断睾丸存在状况的敏感性为92.8%(13/14)。4.检测到患完全性雄激素不敏感综合症的两同胞兄弟AR基因外显子8第2615位的碱基发生G→C置换,导致了所编码的氨基酸发生错义突变由精氨酸R突变为苏氨酸T(Arg872Thr)。结论:1.MIS在男性假两性畸形的诊断中有较重要意义,当患者的MIS水平高时,多为男性假两性畸形;而T虽在其诊断中意义不大,但对于其分型有意义,同时还可作为评估患者治疗效果的检测指标。2.在男性假两性畸形的诊断中SRY基因对于睾丸存在与否的敏感性为92.8%,不能作为判断睾丸的存在与否唯一指标,其与MIS相结合则可提高诊断的准确率。3.我们发现了一个新的点突变:雄激素受体(AR)基因外显子8第2615位的碱基发生G→C置换,导致了所编码的氨基酸发生错义突变由精氨酸R突变为苏氨酸T(Arg872Thr)。这一突变可能是导致完全性雄激素不敏感综合症的一个致病因素。