论文部分内容阅读
【目的】乏氧是导致晚期鼻咽癌患者局部控制率降低,远处转移增加以及肿瘤细胞放射治疗耐受的一个重要因素。实验及临床数据显示乏氧通过影响肿瘤细胞基因稳定性、凋亡、血管生成以及诱导参与肿瘤细胞恶性转化的多种基因及蛋白表达,导致肿瘤细胞对抗肿瘤药物及放射线的敏感性降低。藤黄酸(Gambogic Acid),作为藤黄的主要活性成分之一,体内外均显示具有良好的抗肿瘤效应,具有明确的放疗增敏作用,然而其增敏的分子机制仍未阐明。本研究旨在探讨GA对鼻咽癌放射增敏效应及其相关的作用机制,为藤黄酸的临床应用提供实验依据。【方法】CCK-8测定法、集落形成试验和流式细胞术分析细胞增殖,集落形成,细胞凋亡和细胞周期。Western Blot和/或免疫荧光的方法分析及评估HIF-1α、Bcl-2、Bax、caspase-3、cyclin B1/p-cdc2和γ-H2AX蛋白的表达。【结果】藤黄酸显著抑制CNE-1/CNE-2细胞增殖,且存在浓度依赖性,24h半数抑制剂量IC50分别为1.68±0.2μmol/L和1.73±0.10μmol/L。常氧和乏氧环境下给予不同浓度藤黄酸(0.25和0.5μmol/L)预处理24小时后,常氧条件下,CNE-1细胞放射增敏比(SER)分别为:1.17和1.41;CNE-2分别为:1.28和1.77。乏氧条件下,CNE-1细胞放射增敏比(SER)分别为:1.08和1.33;CNE-2分别为:1.76和2.02。克隆形成结果表明藤黄酸对鼻咽癌具有放射增敏作用。藤黄酸联合放疗作用于鼻咽癌CNE-2细胞48h后,能够诱导乏氧条件下CNE-2细胞的凋亡,且呈现显著地量效依赖关系。乏氧环境下,我们观察到藤黄酸联合辐照作用于CNE-2细胞后,G2/M期阻滞随藤黄酸浓度的增大而增加。免疫印迹结果显示:藤黄酸诱导细胞凋亡及周期阻滞可能与caspase-3和Bax蛋白上调及Bcl2、cyclin B1/p-cdc2蛋白下调相关。可能与乏氧环境下藤黄酸能降低乏氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达相关。【结论】本研究结果表明藤黄酸对乏氧鼻咽癌细胞具有放射增敏作用,其机制可能与下调乏氧环境中HIF-1α的表达有关。