核苷酸(Nucleotide,NT)是生物体内一种极其重要的低分子化合物,核苷酸及其相关代谢产物在许多生物学过程中起着关键作用。当今水产养殖发展迅速,但伴随着集约化养殖程度的不断加深,抗生素滥用问题日益凸显,严重威胁水产养殖安全状况。在养殖过程中不仅要关注水产动物的营养需求,更需要从饲料本身关注养殖动物的健康问题。近年来,饲料中添加具有促生长及免疫功能的营养素逐渐成为替代饲用抗生素的一种重要策略。通过饲料中添加核苷酸,达到提高水产动物生长性能,增强鱼体免疫力及抗病力的功效。本文研究了外源核苷酸添加对斑马鱼脂代谢和先天性免疫水平的调控和相关的机理,为核苷酸在生产中的应用提供更多依据。本试验第一部分我们首先研究了添加0.1%复合核苷酸对斑马鱼的生长和脂质代谢的影响。通过检测肝脏和肌肉组织TAG(甘油三酯)含量、及HE切片分析,发现添加0.1%复合核苷酸在促进斑马鱼生长的同时可以降低肝脏脂肪含量并提高肌肉脂肪含量。同时,我们又以斑马鱼幼鱼为研究对象,饲喂0.1%复合核苷酸后称重并进行油红染色,结果发现幼鱼油红染色肝脏脂肪明显降低,同时终末体重显著升高,这一结果与成年斑马鱼中的结果比较一致。进而,通过单核苷酸添加试验,依据生长和肝脏肌肉TAG含量结果,我们发现AMP(腺苷酸)相比于其他单核苷酸的相对优势。因此,我们进一步探索AMP对斑马鱼脂代谢影响的机。首先我们检测了不同浓度AMP对生长和肝脏TAG含量的影响结果,发现添加0.02%AMP效果最佳。然后针对0.02%AMP添加组进行HE切片分析、肝脏及肌肉组织脂代谢相关基因表达和AMP含量检测,并通过Western blot检测AMPK催化区的Thr172磷酸化来探讨对AMPK的激活效应,推测AMP入肝后激活AMPK磷酸化,刺激脂肪酸的氧化作用,最终达到降低肝脏脂肪的效果。本试验第二部分研究了外源核苷酸添加对斑马鱼的抗病性和先天性免疫的影响和机理。首先用嗜水气单胞菌NJ-1对添加核苷酸饲喂后的斑马鱼进行攻毒,发现0.1%NT添加可提高斑马鱼的抗病力,进一步的试验发现0.1%NT组肠道粘蛋白,紧密连接蛋白,抗菌肽,Mpo(髓过氧化物酶)和Saa(血清淀粉样蛋白A)的相对表达增加(P<0.05),这表明添加核苷酸增强了斑马鱼肠道的物理屏障和肠粘膜免疫力。同时头肾中的ROS水平显著增加,说明核苷酸提高了斑马鱼系统免疫。为了研究肠道微生物在核苷酸影响机体免疫过程中的作用,采用无菌斑马鱼及菌群转接技术,无菌斑马鱼转接对照组和NT组菌群发现,Mpo,Saa的表达和ROS活性方面没有显著差异,并且两组未显示出抗病性差异。而0.1%NT直接饲喂无菌斑马鱼显著可提高Mpo,Saa的表达和ROS活性,并且提高了斑马鱼的抗病力。因此,我们认为NT可以直接刺激鱼体的先天免疫反应。NT对鱼体的抗病保护作用也是直接作用,而不是通过肠道微生物介导的。综上所述,本试验研究了核苷酸添加对斑马鱼脂代谢和免疫的调控和机理,发现了AMP在调控斑马鱼脂代谢过程中的作用和初步机理。除此之外,研究了核苷酸对斑马鱼的免疫调控机理,发现核苷酸的免疫调控作用不依赖于斑马鱼肠道菌群。