野牛草组织培养和植株再生体系的建立

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野牛草组织培养的外植体有幼苗片段、叶基、雄花幼穗和成熟胚等。愈伤诱导阶段是以MS培养基附加不同浓度的2,4-D(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid)进行,2,4-D浓度在2.0mg/L左右都能对各种外植体诱导出愈伤组织,这期间加入适当浓度的Ag+能有效抑制愈伤组织的褐化并且有利于下一步的分化培养。继代和分化培养是在MS培养基附加不同浓度的6-BA(6-benzyladenine)和其他一些生长调节物质的培养基上完成。植株的生根,在附加了NAA或者IBA的MS培养基能很好完成。植株的再生过程在生根完成后,经过一个星期到两个星期的炼苗后移至蛭石:珍珠岩:泥炭土为3:3:4或者珍珠岩、蛭石、草炭土各1/3的基质中并且配合适当光照都能很好完成。 本文研究了以野牛草雄花幼穗和成熟胚分别作为外植体建立组织培养和植株再生体系及其影响因素,结果表明: (1)成熟胚(成熟胚)作为外植体时以MS为基本培养基,加3%蔗糖,pH值5.8;愈伤组织诱导和继代在2.0,6.0mg/L 2,4-D的培养基上、25±1℃、黑暗条件下培养能很好获得愈伤组织;分化培养在B5+3.0mg/L 2,4-D+1.8mg/L 6-BA+50mg/L CH的培养基上进行;继代培养转入MS+2.0mg/L6-BA+50mg/L CH培养基里培养能促进愈伤组织分化;在1/2MS+0.5mg/L NAA和1/2MS+1.0mg/L NAA,25±1℃全日光照下进行培养,植株能完成生根和植株再生。 (2)雄花幼穗作为外植体时愈伤组织诱导和继代以MS+2.0mg/L 2,4-D+10mg/L AgNO3加3%蔗糖为培养基,在pH值5.8,25±1℃,黑暗条件下进行;20~30d后,将诱导出来的胚性愈伤组织转入继代培养基MS+2.0mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA上继代和分化;1/2MS+0.3mg/L NAA上生根、MS上壮苗培养,均在25±1℃全光照条件下进行可以完成。
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